目的研究全反式維甲酸（ATRA）對人胚胎腎HEK-293細胞中CD2相關蛋白（CD2AP）基因表達的影響。方法 ATRA作用HEK-293細胞后,采用RT-PCR和Western blot分別檢測CD2AP mRNA及其蛋白的表達。將構建的不同Sp1/Sp3位點的定點突變、巢式缺失突變的CD2AP啟動子質粒轉染HEK-293細胞,檢測報告質粒的熒光素酶活性。結果 ATRA明顯上調HEK-293細胞中CD2AP mRNA和蛋白水平（P<0.05）。缺失突變及點突變研究顯示,Sp1/Sp3-A、C位點在介導ATRA上調CD2AP過程中發(fā)揮重要作用。結論 ATRA通過Sp1/Sp3結合位點誘導HEK-293細胞中CD2AP的表達;ATRA對CD2AP基因缺陷腎病患者可能有治療作用。 

【文章來源】：江蘇醫(yī)藥. 2013,39(09)北大核心

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ａＰ＜０．０５圖１ＡＴＲＡ對ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表達的作用與０ｈ

ＴＲＡ培養(yǎng)４８ｈ后收集細胞，用化學發(fā)光檢測儀測定報告質粒的熒光素酶活性，以ｐＲＬ－ＴＫ的發(fā)光值標準化數(shù)據(jù)。三、統(tǒng)計學處理應用ＳＰＳＳ１３．０軟件進行統(tǒng)計學分析，原始數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布的用均數(shù)±標準差（珔ｘ±ｓ）表示；均數(shù)兩兩比較采用ｔ檢驗；Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計學意義。結果一、ＡＴＲＡ上調ＨＥＫ－２９３細胞的ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平加入ＡＴＲＡ后，ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平明顯增加（Ｐ＜０．０５）（圖１）。與０ｈ比較，ａＰ＜０．０５圖１ＡＴＲＡ對ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表達的作用二、ＡＴＲＡ上調ＨＥＫ－２９３細胞的ＣＤ２ＡＰ蛋白水平經過ＡＴＲＡ處理４８ｈ后，ＣＤ２ＡＰ蛋白表達明顯增加（Ｐ＜０．０５）（圖２）。與０μＭ比較，ａＰ＜０．０５圖２ＡＴＲＡ對ＣＤ２ＡＰ蛋白表達的作用三、ＣＤ２ＡＰ啟動子區(qū)巢式缺失突變所致的活性變化ＡＴＲＡ上調含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位點的０．６ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動子活性（Ｐ＜０．０５），部分上調了含Ｓｐ１／·１０００·江蘇醫(yī)藥２０１３年５月第３９卷第９期ＪｉａｎｇｓｕＭｅｄＪ，Ｍａｙ２０１３，Ｖｏｌ３９，Ｎｏ．９

Ｓｐ３－Ｃ、Ｄ位點的０．５ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動子活性（Ｐ＜０．０５），但不能調高僅含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｄ位點的０．３ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動子活性（Ｐ＞０．０５），進一步缺失突變Ｓｐ１／Ｓｐ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位點的０．２ｋｂ、０．１ｋｂ的ＣＤ２ＡＰ啟動子無明顯活性（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ位點可能在介導ＡＴＲＡ上調ＣＤ２ＡＰ過程中發(fā)揮重要作用，Ｄ位點不起作用（圖３）。圖３ＡＴＲＡ對含不同Ｓｐ位點的系列缺失ＣＤ２ＡＰ啟動子活性的作用四、ＣＤ２ＡＰ啟動子區(qū)Ｓｐ位點突變所致的活性變化研究顯示，突變Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位點后，啟動子活性有明顯下降（Ｐ＜０．０５），而突變Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｂ、Ｄ位點后，啟動子活性下降不明顯（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位點在介導ＡＴＲＡ的這種調節(jié)中起作用，而Ｂ、Ｄ位點不起作用（圖４）。圖４ＡＴＲＡ對含不同Ｓｐ１／Ｓｐ３位點的點突變ＣＤ２ＡＰ啟動子活性的作用討論ＣＤ２相關蛋白（ＣＤ２ＡＰ）是Ｔ淋巴細胞ＣＤ２的接頭蛋白，是腎小球硬化易感的決定因素之一。在研究ＣＤ２ＡＰ敲除小鼠時，除出現(xiàn)預期的小鼠免疫功能下降外，還發(fā)現(xiàn)小鼠產生類似人的局灶性節(jié)段性腎小球硬化（ＦＳＧＳ）的病變、先天性腎病的臨床表現(xiàn)［５］，證實了ＣＤ２ＡＰ異常在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。維甲酸在生物個體發(fā)育及維持正常生理狀態(tài)中有重要作用，有介導細胞分化、增殖、凋亡及調節(jié)免疫等功能［６－９］


本文編號：3337634