目的研究全反式維甲酸（ATRA）對(duì)人胚胎腎HEK-293細(xì)胞中CD2相關(guān)蛋白（CD2AP）基因表達(dá)的影響。方法 ATRA作用HEK-293細(xì)胞后,采用RT-PCR和Western blot分別檢測(cè)CD2AP mRNA及其蛋白的表達(dá)。將構(gòu)建的不同Sp1/Sp3位點(diǎn)的定點(diǎn)突變、巢式缺失突變的CD2AP啟動(dòng)子質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞,檢測(cè)報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性。結(jié)果 ATRA明顯上調(diào)HEK-293細(xì)胞中CD2AP mRNA和蛋白水平（P<0.05）。缺失突變及點(diǎn)突變研究顯示,Sp1/Sp3-A、C位點(diǎn)在介導(dǎo)ATRA上調(diào)CD2AP過(guò)程中發(fā)揮重要作用。結(jié)論 ATRA通過(guò)Sp1/Sp3結(jié)合位點(diǎn)誘導(dǎo)HEK-293細(xì)胞中CD2AP的表達(dá);ATRA對(duì)CD2AP基因缺陷腎病患者可能有治療作用。 

【文章來(lái)源】：江蘇醫(yī)藥. 2013,39(09)北大核心

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ａＰ＜０．０５圖１ＡＴＲＡ對(duì)ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表達(dá)的作用與０ｈ

ＴＲＡ培養(yǎng)４８ｈ后收集細(xì)胞，用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定報(bào)告質(zhì)粒的熒光素酶活性，以ｐＲＬ－ＴＫ的發(fā)光值標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用ＳＰＳＳ１３．０軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，原始數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布的用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（珔ｘ±ｓ）表示；均數(shù)兩兩比較采用ｔ檢驗(yàn)；Ｐ＜０．０５為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果一、ＡＴＲＡ上調(diào)ＨＥＫ－２９３細(xì)胞的ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平加入ＡＴＲＡ后，ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ水平明顯增加（Ｐ＜０．０５）（圖１）。與０ｈ比較，ａＰ＜０．０５圖１ＡＴＲＡ對(duì)ＣＤ２ＡＰｍＲＮＡ表達(dá)的作用二、ＡＴＲＡ上調(diào)ＨＥＫ－２９３細(xì)胞的ＣＤ２ＡＰ蛋白水平經(jīng)過(guò)ＡＴＲＡ處理４８ｈ后，ＣＤ２ＡＰ蛋白表達(dá)明顯增加（Ｐ＜０．０５）（圖２）。與０μＭ比較，ａＰ＜０．０５圖２ＡＴＲＡ對(duì)ＣＤ２ＡＰ蛋白表達(dá)的作用三、ＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子區(qū)巢式缺失突變所致的活性變化ＡＴＲＡ上調(diào)含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位點(diǎn)的０．６ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子活性（Ｐ＜０．０５），部分上調(diào)了含Ｓｐ１／·１０００·江蘇醫(yī)藥２０１３年５月第３９卷第９期ＪｉａｎｇｓｕＭｅｄＪ，Ｍａｙ２０１３，Ｖｏｌ３９，Ｎｏ．９

Ｓｐ３－Ｃ、Ｄ位點(diǎn)的０．５ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子活性（Ｐ＜０．０５），但不能調(diào)高僅含Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｄ位點(diǎn)的０．３ｋｂＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子活性（Ｐ＞０．０５），進(jìn)一步缺失突變Ｓｐ１／Ｓｐ３Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ位點(diǎn)的０．２ｋｂ、０．１ｋｂ的ＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子無(wú)明顯活性（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｂ、Ｃ位點(diǎn)可能在介導(dǎo)ＡＴＲＡ上調(diào)ＣＤ２ＡＰ過(guò)程中發(fā)揮重要作用，Ｄ位點(diǎn)不起作用（圖３）。圖３ＡＴＲＡ對(duì)含不同Ｓｐ位點(diǎn)的系列缺失ＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子活性的作用四、ＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子區(qū)Ｓｐ位點(diǎn)突變所致的活性變化研究顯示，突變Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位點(diǎn)后，啟動(dòng)子活性有明顯下降（Ｐ＜０．０５），而突變Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ｂ、Ｄ位點(diǎn)后，啟動(dòng)子活性下降不明顯（Ｐ＞０．０５），表明Ｓｐ１／Ｓｐ３－Ａ、Ｃ位點(diǎn)在介導(dǎo)ＡＴＲＡ的這種調(diào)節(jié)中起作用，而Ｂ、Ｄ位點(diǎn)不起作用（圖４）。圖４ＡＴＲＡ對(duì)含不同Ｓｐ１／Ｓｐ３位點(diǎn)的點(diǎn)突變ＣＤ２ＡＰ啟動(dòng)子活性的作用討論ＣＤ２相關(guān)蛋白（ＣＤ２ＡＰ）是Ｔ淋巴細(xì)胞ＣＤ２的接頭蛋白，是腎小球硬化易感的決定因素之一。在研究ＣＤ２ＡＰ敲除小鼠時(shí)，除出現(xiàn)預(yù)期的小鼠免疫功能下降外，還發(fā)現(xiàn)小鼠產(chǎn)生類(lèi)似人的局灶性節(jié)段性腎小球硬化（ＦＳＧＳ）的病變、先天性腎病的臨床表現(xiàn)［５］，證實(shí)了ＣＤ２ＡＰ異常在腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。維甲酸在生物個(gè)體發(fā)育及維持正常生理狀態(tài)中有重要作用，有介導(dǎo)細(xì)胞分化、增殖、凋亡及調(diào)節(jié)免疫等功能［６－９］


本文編號(hào)：3337634