目的分析日本血吸蟲核苷酸交換因子（SjGrpE）蛋白生物學特性,表達與純化重組SjGrpE蛋白并測定其免疫原性。方法采用生物信息學方法預測SjGrpE蛋白的氨基酸組成、分子量、親/疏水性、跨膜區(qū)、信號肽、定位、磷酸化位點、泛素化位點、糖基化位點、二級和三級結構及B細胞表位。以日本血吸蟲cDNA為模板,PCR擴增SjGrpE基因,將其雙酶切后連接到pET28a載體得到重組質粒pET28a-SjGrpE。將pET28a-SjGrpE轉化大腸埃希菌BL21,用IPTG誘導目的蛋白表達,并用鎳離子親和層析法純化蛋白。將重組SjGrpE蛋白免疫小鼠,分離血清并鑒定獲得的抗多克隆抗體。結果SjGrpE蛋白分子量約為24.3 kDa,是一種親水性蛋白,無跨膜區(qū)、無信號肽,定位在線粒體;該蛋白含有18個磷酸化位點和2個泛素化位點,無糖基化位點,含有5個B細胞表位。SjGrpE基因全長為660 bp,成功構建重組質粒pET28a-SjGrpE并純化獲得重組SjGrpE蛋白。重組SjGrpE蛋白能夠刺激小鼠分泌高滴度抗體。結論成功制備重組SjGrpE蛋白,該蛋白具有良好免疫原性,為后續(xù)研究其作為日本血吸蟲... 

【文章來源】：中國血吸蟲病防治雜志. 2020,32(04)北大核心CSCD

【文章頁數】：6 頁

【部分圖文】：

SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位點預測FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A磷酸化位點；B泛素化位點Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite

中國血吸蟲病防治雜志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4注：A磷酸化位點；B泛素化位點Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite圖2SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位點預測FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A跨膜區(qū)；B信號肽Note:ATransmembraneregion;BSignalpeptide圖3SjGrpE蛋白跨膜區(qū)和信號肽預測FigFig.3PredictionofthetransmembraneregionandsignalpeptideoftheSjGrpEprotein注：A二級結構；B三級結構Note:ASecondarystructure;BTertiarystructure圖4SjGrpE蛋白二級結構和三級結構預測FigFig.4PredictionofthesecondaryandtertiarystructuresoftheSjGrpEprotein1.6B細胞表位利用BepiPred2.0工具預測SjGrpE蛋白B細胞表位，發(fā)現SjGrpE蛋白1~38、100~119、152~163、177~182位和191~201位氨基酸閾值高于設定值（圖5），故認為這些多肽片段為B細胞表位，其具體氨基酸序列見表1。圖5SjGrpE蛋白B細胞表位預測FigFig.5PredictionofBcellepitopesofSjGrpEprotein表1SjGrpE蛋白B細胞表位氨基酸序列Table1AminoacidsequenceofBcellepitopesoftheSjGrpEprotein編號Number12345開始Start4100152177191結束End34119163182201肽段序列PeptidesequenceGVATIFPRCVHRCSARLIHFRFPVVSGLCSGFGIQSFCKDLLEVADVLTTAKVFSHYNLVRISAIFQAPTVAVVTKIGYQ··358

饕??α螺旋和無規(guī)卷曲組成，其中99個（45.62%）氨基酸殘基是α螺旋、97個（44.70%）屬于無規(guī)則卷曲、17個（7.83%）是β片層，不含β轉角（圖4A）。使用同源建模方法，以SWISSMODEL蛋白質結構數據庫中嗜熱棲熱菌（Thermusthermophilus）HB8株同源序列（PDB編號：3a6m.1）為SjGrpE蛋白模板進行預測，發(fā)現SjGrpE三級結構是由兩個單體構成的二聚體，N端由大量α螺旋構成、C端由無規(guī)則卷曲和β片層構成（圖4B）。注：A氨基酸組成；B親水性Note:AAminoacidcomposition;Bhydrophilicity圖1SjGrpE蛋白的氨基酸組成及親水性預測Figig.1PredictionofaminoacidcompositionandhydrophilicityoftheSjGrpEprotein··357

【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國血吸蟲病消除工作進展及面臨的挑戰(zhàn)[J]. 許靜,呂山,曹淳力,李石柱,周曉農.  中國血吸蟲病防治雜志. 2018(06)
[2]雞毒支原體熱休克蛋白GrpE粘附特性的鑒定[J]. 周長平,陳瑩,李媛,高利萍,王顯兵,王莉莉,于艷超,辛九慶.  中國預防獸醫(yī)學報. 2017(01)
[3]熱休克蛋白70的功能及其在寄生蟲生長發(fā)育中的作用[J]. 何思杰,呂志躍,吳忠道.  熱帶醫(yī)學雜志. 2010(05)
[4]熱休克蛋白與寄生蟲感染的關系[J]. 王強,李勉,張龍現.  中國畜牧獸醫(yī). 2009(06)



本文編號：3323533