目的分析日本血吸蟲(chóng)核苷酸交換因子（SjGrpE）蛋白生物學(xué)特性,表達(dá)與純化重組SjGrpE蛋白并測(cè)定其免疫原性。方法采用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)SjGrpE蛋白的氨基酸組成、分子量、親/疏水性、跨膜區(qū)、信號(hào)肽、定位、磷酸化位點(diǎn)、泛素化位點(diǎn)、糖基化位點(diǎn)、二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)及B細(xì)胞表位。以日本血吸蟲(chóng)cDNA為模板,PCR擴(kuò)增SjGrpE基因,將其雙酶切后連接到pET28a載體得到重組質(zhì)粒pET28a-SjGrpE。將pET28a-SjGrpE轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,用IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),并用鎳離子親和層析法純化蛋白。將重組SjGrpE蛋白免疫小鼠,分離血清并鑒定獲得的抗多克隆抗體。結(jié)果SjGrpE蛋白分子量約為24.3 kDa,是一種親水性蛋白,無(wú)跨膜區(qū)、無(wú)信號(hào)肽,定位在線粒體;該蛋白含有18個(gè)磷酸化位點(diǎn)和2個(gè)泛素化位點(diǎn),無(wú)糖基化位點(diǎn),含有5個(gè)B細(xì)胞表位。SjGrpE基因全長(zhǎng)為660 bp,成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pET28a-SjGrpE并純化獲得重組SjGrpE蛋白。重組SjGrpE蛋白能夠刺激小鼠分泌高滴度抗體。結(jié)論成功制備重組SjGrpE蛋白,該蛋白具有良好免疫原性,為后續(xù)研究其作為日本血吸蟲(chóng)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志. 2020,32(04)北大核心CSCD

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SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位點(diǎn)預(yù)測(cè)FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A磷酸化位點(diǎn)；B泛素化位點(diǎn)Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite

中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志2020年第32卷第4期ChinJSchistoControl2020，Vol.32，No.4注：A磷酸化位點(diǎn)；B泛素化位點(diǎn)Note:APhosphorylationsite;BUbiquitinationsite圖2SjGrpE蛋白磷酸化和泛素化位點(diǎn)預(yù)測(cè)FigFig.2PredictionofphosphorylationandubiquitinationsitesoftheSjGrpEprotein注：A跨膜區(qū)；B信號(hào)肽Note:ATransmembraneregion;BSignalpeptide圖3SjGrpE蛋白跨膜區(qū)和信號(hào)肽預(yù)測(cè)FigFig.3PredictionofthetransmembraneregionandsignalpeptideoftheSjGrpEprotein注：A二級(jí)結(jié)構(gòu)；B三級(jí)結(jié)構(gòu)Note:ASecondarystructure;BTertiarystructure圖4SjGrpE蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)FigFig.4PredictionofthesecondaryandtertiarystructuresoftheSjGrpEprotein1.6B細(xì)胞表位利用BepiPred2.0工具預(yù)測(cè)SjGrpE蛋白B細(xì)胞表位，發(fā)現(xiàn)SjGrpE蛋白1~38、100~119、152~163、177~182位和191~201位氨基酸閾值高于設(shè)定值（圖5），故認(rèn)為這些多肽片段為B細(xì)胞表位，其具體氨基酸序列見(jiàn)表1。圖5SjGrpE蛋白B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)FigFig.5PredictionofBcellepitopesofSjGrpEprotein表1SjGrpE蛋白B細(xì)胞表位氨基酸序列Table1AminoacidsequenceofBcellepitopesoftheSjGrpEprotein編號(hào)Number12345開(kāi)始Start4100152177191結(jié)束End34119163182201肽段序列PeptidesequenceGVATIFPRCVHRCSARLIHFRFPVVSGLCSGFGIQSFCKDLLEVADVLTTAKVFSHYNLVRISAIFQAPTVAVVTKIGYQ··358

饕??α螺旋和無(wú)規(guī)卷曲組成，其中99個(gè)（45.62%）氨基酸殘基是α螺旋、97個(gè)（44.70%）屬于無(wú)規(guī)則卷曲、17個(gè)（7.83%）是β片層，不含β轉(zhuǎn)角（圖4A）。使用同源建模方法，以SWISSMODEL蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)中嗜熱棲熱菌（Thermusthermophilus）HB8株同源序列（PDB編號(hào)：3a6m.1）為SjGrpE蛋白模板進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)SjGrpE三級(jí)結(jié)構(gòu)是由兩個(gè)單體構(gòu)成的二聚體，N端由大量α螺旋構(gòu)成、C端由無(wú)規(guī)則卷曲和β片層構(gòu)成（圖4B）。注：A氨基酸組成；B親水性Note:AAminoacidcomposition;Bhydrophilicity圖1SjGrpE蛋白的氨基酸組成及親水性預(yù)測(cè)Figig.1PredictionofaminoacidcompositionandhydrophilicityoftheSjGrpEprotein··357

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3323533