目的:制備抗粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF）納米抗體,并測定其親和力。方法:分離提取GM-CSF免疫后羊駝外周血淋巴細胞總RNA,PCR擴增得到納米抗體基因片段,與載體pHEN1重組后克隆至大腸桿菌TG1以構建初始文庫,經拯救構建得到噬菌體展示納米抗體文庫,并對其進行生物淘選;通過大腸桿菌BL21（DE3）原核表達陽性納米抗體克隆,并測定其親和力。結果:構建了多樣性良好且?guī)烊萘繛?.37×10⁹cfu的納米抗體初始文庫,3輪淘選后共篩選得到5株氨基酸序列差異性較大的納米抗體,并對其中一株納米抗體G1進行表達純化,SDS-PAGE分析表明納米抗體G1純度較高,且有較高的親和力(K_D=2.95×10^-8mol/L)。結論:制備了高親和力的抗GM-CSF納米抗體,可應用于相關炎癥抗體藥物研制和疾病監(jiān)測等方面。 

【文章來源】：生物技術通訊. 2020,31(02)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

初始文庫的氨基酸序列比對結果

納米抗體的分子大小僅為傳統(tǒng)單克隆抗體的1/10，具有獨特的優(yōu)勢，如體積小、穩(wěn)定性高，能夠穿過血腦屏障并持續(xù)穩(wěn)定地發(fā)揮作用；納米抗體還可實現(xiàn)在原核生物中大量表達，可以大大降低生產成本，且免疫原性低[19]，在細胞中容易被清除，從而保證對人體無害。更重要的，納米抗體有著更長的抗原結合互補區(qū)CDR1和CDR3，具有比傳統(tǒng)單克隆抗體更強的抗原結合能力，并且依據(jù)納米抗體易改造的特點，還可通過點突變等基因工程技術進一步提高納米抗體的親和力[20]。而單克隆抗體由于組織滲透性差，體內不易被清除且制備成本高，從而限制了其臨床應用。圖6 納米抗體G1的氨基酸序列

納米抗體G1的氨基酸序列

【參考文獻】：
期刊論文
[1]抗脂多糖納米抗體的篩選及其五聚體的制備[J]. 武文,李勝華,張偉京,王炳奇.  生物技術通訊. 2013(05)
[2]駝源天然單域重鏈抗體庫的構建與鑒定[J]. 涂追,許楊,劉夏,何慶華,陶勇.  中國生物工程雜志. 2011(04)



本文編號：3319832