研究背景與目的:細胞衰老是細胞發(fā)生不可逆的生長停滯的現(xiàn)象。衰老細胞具有一系列的特征,如β-半乳糖苷酶活性升高、DNA損傷累積、衰老相關(guān)的異染色質(zhì)凝集點（SAHF）增加及衰老相關(guān)蛋白的表達增加等。表皮生長因子EGF是一個重要的有絲分裂原,目前大多數(shù)的研究表明EGF能夠抑制細胞衰老、延長細胞壽命,僅有少數(shù)研究提出EGF能夠抑制細胞生長、誘導(dǎo)細胞衰老或凋亡,但其中的機制尚未被闡明。本研究發(fā)現(xiàn)EGF能夠誘導(dǎo)人胚肺成纖維細胞IMR90發(fā)生衰老,所以本課題主要對EGF誘導(dǎo)IMR90細胞衰老的機制進行了探究。研究方法與結(jié)果:在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)EGF能夠誘導(dǎo)IMR90細胞發(fā)生衰老。首先,細胞生長曲線和Brd U摻入實驗證明了EGF處理抑制了IMR90細胞的生長。通過觀察,發(fā)現(xiàn)經(jīng)EGF處理的細胞呈現(xiàn)出衰老細胞的表征,SA-β-gal染色和DAPI染色的結(jié)果表明EGF誘導(dǎo)IMR90細胞發(fā)生了衰老。在此基礎(chǔ)上,免疫熒光和免疫印跡技術(shù)的檢測結(jié)果顯示,53BP1凝集點形成,γH2A.X和53BP1蛋白水平上調(diào),表明EGF處理引發(fā)了DNA損傷反應(yīng);p38、p-p38、p53、p-p53、p21和p16蛋白水平上... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

衰老相關(guān)信號通路圖

EGF 誘導(dǎo)人胚肺成纖維細胞衰老的機制研究制 IMR90 細胞增殖的作用，我們進行了 BrdU 摻入實驗。結(jié)果如示，與對照組相比，EGF 處理組（30 nM 和 100 nM）中 BrdU為綠色的細胞）的數(shù)量降低，且這種現(xiàn)象隨著 EGF 濃度的增EGF 降低了 IMR90 細胞的增殖能力。綜合以上結(jié)果，我們得知IMR90 細胞的生長。

2.3.2 EGF 通過誘導(dǎo) IMR90 細胞衰老抑制其生長2.3.2.1 EGF 誘導(dǎo) IMR90 細胞發(fā)生衰老通過觀察，我們發(fā)現(xiàn) EGF 處理后的細胞體積變大、呈扁平狀，與衰老細胞的形態(tài)特征相似。因此，我們猜測 EGF 可能誘導(dǎo) IMR90 細胞發(fā)生了衰老，從而影響了細胞的增殖。為了驗證這一猜想，我們檢測了衰老標(biāo)志物——衰老相關(guān)的β-半乳糖苷酶和SAHF來確定細胞的衰老情況。將IMR90細胞用不同濃度的EGF（3~300 nM）處理 3 天，然后對其進行 SA-β-gal 染色和 DAPI 染色。結(jié)果如圖2.2 所示，與對照組相比，EGF 處理組的 SA-β-gal 陽性細胞和 SAHF 陽性細胞隨EGF 濃度的增加而增加，且在 100 nM 處差異最為顯著（后續(xù)研究選擇 100 nM作為 EGF 的作用濃度）。以上結(jié)果表明，EGF 誘導(dǎo) IMR90 細胞發(fā)生了衰老。


本文編號：3307294