DNA復制是指DNA雙鏈在細胞分裂間期進行的以一個親代DNA分子為模板,合成兩條子代DNA鏈的過程。在真核細胞中,DNA解旋酶復合體（Cdc45–Mcm–GINS helicase complex,簡稱CMG）在DNA復制過程中是形成和維持復制叉主要復合體,Cdc45做為CMG的重要組成分子之一,在調控DNA復制過程中扮演著重要的角色。泛素化指泛素分子在一系列酶的作用下,共價結合到靶蛋白上的過程,參與了真核生物幾乎所有生命活動的調控。目前已有許多研究發(fā)現(xiàn),在DNA復制及損傷修復過程中,多種相關蛋白受到泛素化修飾調控,以保障基因組的穩(wěn)定。本研究中,我們以釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）作為研究對象,探究Cdc45在DNA復制過程中是否存在泛素化修飾,并對其調控機制和在DNA復制中的作用進行初步研究。1)首先,我們通過外源誘導表達,確定了Cdc45的修飾性條帶為泛素化條帶,并通過點突變篩選出Cdc45上的泛素化位點K156和K643。2)然后,我們又通過細胞周期同步化處理和基因敲除等手段,證實Cdc45在復制期間會被泛素連接酶Dia2泛素化,泛素化的Cdc45又... 

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

DNA復制起始的組裝和激活（圖片來自FragkosM,2015,NatRevMolCellBiol）

華 中 科 技 大 學 碩 士 學 位 論 文制起始位點處，并由 2 個 MCM2-7 頭對頭形成雙六聚體環(huán)繞在 DNA 上[12]。但是MCM2-7 雙六聚體是沒有活性的，在 G1/S 期，在 DDK 和 CDK 的作用下，Cdc45和 GINS與之相連并激活其復制解旋酶活性，此后 MCM2-7的 AAA+ ATP 酶亞基以右旋螺旋形式包裹 ssDNA 沿著 3’-5’方向進行解旋[39-41]。MCM2-7 并不是完全封閉的環(huán)，MCM2-7 中的 MCM2 和 MCM5 之間有一個可以開啟和關閉的“門”，通過開關不斷將包住的雙鏈 DNA 在解旋成單鏈 DNA 后排出，其開關的機制可能依賴MCM2 被 DDK 的動態(tài)磷酸化調控[42]。而最近對于 DNA 復制終止階段的研究在不斷進行中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在復制終止期間，MCM 會從染色體上解離，其依靠 MCM7 被Cullin–RING E3 泛素連接酶泛素化[43]�？梢宰C實，MCM2-7 在 DNA 復制的起始、延伸以及終止階段都具有重要作用。

dc45 在應答高水平和低水平的紫外傷害時的不同機制模型（圖片em Soc Trans）。低水平的 UV 或 BPDE 誘導的 DNA 損傷以 Chk，不涉及 Cdc25A 和 CDK2 的變化。而高水平的誘導則會帶來 C Cdc25A 的降解。由此產(chǎn)生的 CDK2 活性抑制可防止 Cdc45 在未. Models of the distinct mechanisms of Cdc45 regulation in respUV damage (From Broderick R, 2009, Biochem Soc Trans). Low DNA damage inhibit Cdc45 loading in a Chk1-dependent manner an25A and CDK2. High levels of induction results in the full activation ogradation of Cdc25A. The resulting inhibition of CDK2 activity prevnset of unactivated replication.說明，Chk1 在高劑量和低劑量 BPDE 處理下激活的 DN在低劑量下，Chk1 會不依賴 Cdc25A 而是通過抑制 Cd DNA 復制的繼續(xù)進行。這也說明 Cdc45 在 DNA 損傷應


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