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人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基凍干粉促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成和抑制巨噬細(xì)胞炎癥

發(fā)布時(shí)間:2021-07-02 11:01
  目的探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基凍干粉(hADMSCs-CMLP)對(duì)成纖維細(xì)胞(HFF-1)遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成水平的影響,以及對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞(Raw264.7)炎癥因子釋放的影響。方法收集人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞P3代細(xì)胞條件培養(yǎng)基上清液,經(jīng)冷凍干燥后,獲得凍干粉制劑。使用前用去離子水溶解,添加到人成纖維細(xì)胞HFF-1和小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7培養(yǎng)基中。用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)篩選凍干粉的濃度,用活細(xì)胞工作站和transwell方法檢測(cè)人成纖維細(xì)胞遷移和細(xì)胞增殖情況;q RT-PCR法檢測(cè)成纖維細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖維粘連蛋白、彈性蛋白、I型膠原蛋白、MMP-1的m RNA水平變化;ELISA法測(cè)定巨噬細(xì)胞Raw264.7炎癥因子TNF-α、IL-6釋放情況。結(jié)果分離傳代培養(yǎng)后,得到的P3代hADMSCs呈長(zhǎng)梭形漩渦狀并貼壁生長(zhǎng),有立體感,其間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志性抗原CD73、CD90、CD105陽(yáng)性表達(dá)率均大于95.00%,CD34、CD45、HLA-DR均小于2.00%;誘導(dǎo)培養(yǎng)21~28d后出現(xiàn)明顯的成脂、成骨和成軟骨細(xì)胞特性;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示50%的hADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉對(duì)成纖... 

【文章來(lái)源】:中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2020,15(05)

【文章頁(yè)數(shù)】:9 頁(yè)

【部分圖文】:

人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基凍干粉促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成和抑制巨噬細(xì)胞炎癥


h ADMSCs表面標(biāo)志物流式鑒定結(jié)果(A~C分別是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D~E分別是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)

形態(tài)圖,表面標(biāo)志,成纖,干粉


圖1 h ADMSCs表面標(biāo)志物流式鑒定結(jié)果(A~C分別是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D~E分別是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)2.3 h ADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移

干粉,細(xì)胞,劃痕,濃度


HFF-1細(xì)胞按上述方法處理后,活細(xì)胞工作站培養(yǎng)觀察24 h,明顯能看到細(xì)胞在加入50%的凍干粉后,實(shí)驗(yàn)組HFF-1基本長(zhǎng)滿圓形空白部分,對(duì)照組HFF-1還有很大空白(圖4B)。說(shuō)明凍干粉能顯著促進(jìn)HFF-1細(xì)胞遷移。相同的處理方法接種于96孔板,培養(yǎng)24 h后,酶標(biāo)儀檢測(cè)顯示添加50%的凍干粉,HFF-1細(xì)胞ATP含量相對(duì)于對(duì)照組無(wú)明顯增高,表明凍干粉對(duì)成纖維細(xì)胞是促進(jìn)遷移,而非增殖(圖4A和C)。另外用transwell方法,可以觀察到細(xì)胞向含有50%h ADMSCs-CMLP培養(yǎng)基下層遷移,結(jié)晶紫染色明顯能看到下層膜細(xì)胞變多,統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(n=3)(圖4D~F)。2.4 h ADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉對(duì)HFF-1細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)的影響[J]. 章毅,陳侃俊,伍婷,祁成,金魏名,孔凡瑞,陳亮.  中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2019(03)
[2]人脂肪干細(xì)胞及外泌體凍干粉的安全性[J]. 李洪超,金銀鵬,王皙,李莉,傅青春.  中國(guó)組織工程研究. 2018(29)



本文編號(hào):3260344

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