目的探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基凍干粉（hADMSCs-CMLP）對(duì)成纖維細(xì)胞（HFF-1）遷移、細(xì)胞外基質(zhì)合成水平的影響,以及對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞（Raw264.7）炎癥因子釋放的影響。方法收集人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞P3代細(xì)胞條件培養(yǎng)基上清液,經(jīng)冷凍干燥后,獲得凍干粉制劑。使用前用去離子水溶解,添加到人成纖維細(xì)胞HFF-1和小鼠巨噬細(xì)胞Raw264.7培養(yǎng)基中。用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)篩選凍干粉的濃度,用活細(xì)胞工作站和transwell方法檢測(cè)人成纖維細(xì)胞遷移和細(xì)胞增殖情況;q RT-PCR法檢測(cè)成纖維細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)蛋白纖維粘連蛋白、彈性蛋白、I型膠原蛋白、MMP-1的m RNA水平變化;ELISA法測(cè)定巨噬細(xì)胞Raw264.7炎癥因子TNF-α、IL-6釋放情況。結(jié)果分離傳代培養(yǎng)后,得到的P3代hADMSCs呈長(zhǎng)梭形漩渦狀并貼壁生長(zhǎng),有立體感,其間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志性抗原CD73、CD90、CD105陽(yáng)性表達(dá)率均大于95.00%,CD34、CD45、HLA-DR均小于2.00%;誘導(dǎo)培養(yǎng)21～28d后出現(xiàn)明顯的成脂、成骨和成軟骨細(xì)胞特性;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示50%的hADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉對(duì)成纖... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2020,15(05)

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【部分圖文】：

h ADMSCs表面標(biāo)志物流式鑒定結(jié)果（A～C分別是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D～E分別是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)

圖1 h ADMSCs表面標(biāo)志物流式鑒定結(jié)果（A～C分別是CD34+、CD45+、HLA-DR+<2.00%;D～E分別是CD73+、CD90+、CD105+>95.00%)2.3 h ADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移

HFF-1細(xì)胞按上述方法處理后，活細(xì)胞工作站培養(yǎng)觀察24 h，明顯能看到細(xì)胞在加入50%的凍干粉后，實(shí)驗(yàn)組HFF-1基本長(zhǎng)滿圓形空白部分，對(duì)照組HFF-1還有很大空白（圖4B）。說(shuō)明凍干粉能顯著促進(jìn)HFF-1細(xì)胞遷移。相同的處理方法接種于96孔板，培養(yǎng)24 h后，酶標(biāo)儀檢測(cè)顯示添加50%的凍干粉，HFF-1細(xì)胞ATP含量相對(duì)于對(duì)照組無(wú)明顯增高，表明凍干粉對(duì)成纖維細(xì)胞是促進(jìn)遷移，而非增殖（圖4A和C）。另外用transwell方法，可以觀察到細(xì)胞向含有50%h ADMSCs-CMLP培養(yǎng)基下層遷移，結(jié)晶紫染色明顯能看到下層膜細(xì)胞變多，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著（n=3）（圖4D～F）。2.4 h ADMSCs條件培養(yǎng)基凍干粉對(duì)HFF-1細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)基因表達(dá)的影響[J]. 章毅,陳侃俊,伍婷,祁成,金魏名,孔凡瑞,陳亮.  中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù). 2019(03)
[2]人脂肪干細(xì)胞及外泌體凍干粉的安全性[J]. 李洪超,金銀鵬,王皙,李莉,傅青春.  中國(guó)組織工程研究. 2018(29)



本文編號(hào)：3260344