目的探討過(guò)表達(dá)原鈣黏蛋白7（Pcdh7）基因?qū)π∈笤由窠?jīng)元突起發(fā)育的影響。方法體外原代培養(yǎng)C57/B6小鼠胚胎18.5 d的大腦皮層神經(jīng)元,隨機(jī)分為空白對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)對(duì)照組（空載組）和過(guò)表達(dá)原鈣黏蛋白7基因組（過(guò)表達(dá)組）。運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)術(shù)檢測(cè)神經(jīng)元突起的標(biāo)記物β-Tubulin Ⅲ的表達(dá)來(lái)反映各組培養(yǎng)的神經(jīng)元軸突的長(zhǎng)度和初級(jí)樹(shù)突分支數(shù),同時(shí),采用Western blot檢測(cè)各組神經(jīng)元Pcdh7及磷酸化絲切蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果過(guò)表達(dá)Pcdh7基因后,其皮層神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度[（247.4±99.38）μm]顯著高于對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)對(duì)照組[分別為（179.4±97.91）μm和（172.1±65.20）μm],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,但其初級(jí)樹(shù)突分支數(shù)（2.74±1.302）卻明顯低于對(duì)照組和空載組（分別為3.726±0.890和3.793±1.196）（P<0.01）;而Western blot結(jié)果顯示,當(dāng)原代培養(yǎng)的神經(jīng)元過(guò)表達(dá)Pcdh7基因時(shí),與對(duì)照組相比,其磷酸化絲切蛋白的表達(dá)水平明顯降低（P<0.01）。結(jié)論在原代培養(yǎng)的小鼠皮層神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)Pcdh7基因... 

【文章來(lái)源】：解剖學(xué)研究. 2020,42(03)

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3 組小鼠皮層神經(jīng)元Pcdh7蛋白水平比較*與空白對(duì)照組相比，P<0.01；#與空載組相比，P<0.01

原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元經(jīng)相應(yīng)病毒處理3 d后，免疫熒光標(biāo)記體外培養(yǎng)的原代皮層神經(jīng)元（E18.5 d的胎鼠）（圖2）。過(guò)表達(dá)組的神經(jīng)元軸突長(zhǎng)度顯著高于對(duì)照組和空載組（P<0.01），空載組與對(duì)照組之間的軸突長(zhǎng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。過(guò)表達(dá)組的神經(jīng)元初級(jí)樹(shù)突分支數(shù)顯著低于對(duì)照組和空載組（P<0.01），且空載組與對(duì)照組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。2.3 各組原代皮層神經(jīng)元p-Cofilin蛋白水平比較

神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育依靠細(xì)胞-細(xì)胞間相互作用進(jìn)行調(diào)節(jié)，這種相互作用主要是由細(xì)胞粘附分子——鈣黏蛋白介導(dǎo)的。原鈣黏蛋白（Pcdhs）作為鈣黏蛋白超家族中最大的亞家族，主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)，可分為簇狀原鈣黏蛋白和非簇狀原鈣黏蛋白[10]。Pcdh7作為非簇狀原鈣黏蛋白中δ1-Pcdhs家族的一員，對(duì)神經(jīng)的發(fā)育過(guò)程具有重要作用，包括軸突引導(dǎo)[11]和突觸發(fā)生[12]。既往研究顯示，Pcdh7基因的異常表達(dá)與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[8-9,13]，但其在神經(jīng)發(fā)育過(guò)程中所發(fā)揮的作用仍需進(jìn)一步研究。本課題組前期研究結(jié)果表明，Pcdh7在小鼠大腦的發(fā)育過(guò)程中呈現(xiàn)時(shí)間空間特異性表達(dá)模式[14]。自胚胎期12.5 d開(kāi)始，Pcdh7在小鼠大腦皮層中的相對(duì)表達(dá)量逐漸升高，至胚胎期18.5 d到達(dá)峰值，推測(cè)其可能在小鼠大腦皮層的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮作用。在皮層神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)Pcdh7導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡率明顯升高，而在此基礎(chǔ)上干擾Pcdh7的表達(dá)可適當(dāng)降低神經(jīng)元的凋亡率[5]。已有文獻(xiàn)報(bào)道，在軸突引導(dǎo)因子Sema3a存在的情況下，Pcdh7在非洲蟾蜍中的異構(gòu)體NF-Protocadherin表達(dá)水平明顯上升，可顯著升高其視網(wǎng)膜神經(jīng)元生長(zhǎng)錐發(fā)生崩塌的概率[15]。同樣，本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在小鼠皮層神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)Pcdh7能夠顯著促進(jìn)軸突過(guò)度生長(zhǎng)，同時(shí)抑制初級(jí)樹(shù)突分支的產(chǎn)生，提示在小鼠皮層神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)Pcdh7基因會(huì)影響其軸突的正常發(fā)育。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]ICR小鼠腦發(fā)育過(guò)程中原鈣黏蛋白7a表達(dá)及意義[J]. 肖華娟,亓月,李佳娜,熊軼.  中華實(shí)用診斷與治療雜志. 2017(11)



本文編號(hào)：3259780