目的篩選、鑒定登革病毒（Dengue virus,DENV）2型（DV2）型特異性抗原片段;建立優(yōu)化檢測(cè)DV2抗體的ELISA方法,并進(jìn)行臨床應(yīng)用驗(yàn)證。方法采用生物信息學(xué)方法分析1～4型（DV1～DV4）及其相近蟲媒病毒基因組序列,選擇預(yù)測(cè)得分較高且在不同DV2流行株中高度保守的表位;利用pMal-c2x表達(dá)系統(tǒng)制備其原核表達(dá)抗原,Western blot法分析其免疫原性;建立優(yōu)化檢測(cè)DV2抗體的ELISA方法,并驗(yàn)證方法的特異性及靈敏性;應(yīng)用優(yōu)化的方法檢測(cè)33份各型登革熱（Dengue fever,DF）確診患者及30份健康體檢人群血清樣本。結(jié)果經(jīng)生物信息學(xué)分析,預(yù)測(cè)獲得DV2特異性抗原表位12段,預(yù)測(cè)得分值較高的8段（E123～128、E131～135、E143～149、E223～229、E286～294、E340～347、E383～387及E391～398）重組表達(dá)載體經(jīng)雙向測(cè)序證實(shí)讀碼框架準(zhǔn)確,經(jīng)Western blot分析,包含抗原位點(diǎn)E143～149區(qū)域的融合表達(dá)片段D2Ag3僅與DV2多克隆抗體發(fā)生免疫反應(yīng)。ELISA優(yōu)化條件為抗原包被濃度2μg/mL,4℃包被24 h,... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020,33(05)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【圖文】：

重組原核表達(dá)抗原的Western blot分析

ELISA反應(yīng)包被條件優(yōu)化結(jié)果

結(jié)果顯示，抗原包被濃度在0.25～2μg/mL時(shí)，A450呈上升趨勢(shì)，2μg/mL抗原的A450達(dá)到峰值，在2～4μg/mL濃度范圍內(nèi)保持相對(duì)穩(wěn)定，隨后隨著包被濃度增加，A450稍有下降，見圖3。確定最適包被濃度為2μg/mL。2.4.3 封閉時(shí)間

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3237172