一、研究背景瘧疾是一種通過蚊蟲叮咬傳染,將瘧原蟲帶到血液中,短時期內(nèi)引起周期性規(guī)律發(fā)作的全身發(fā)冷、發(fā)熱、多汗,長期多次發(fā)作后,引起貧血和脾腫大等癥狀的蟲媒傳染病,目前仍然是全球最重要的傳染病之一。根據(jù)世衛(wèi)組織2018年12月公布的最新估算數(shù)據(jù),2017年全球有2.19億起瘧疾病例,共有43.5萬人因瘧疾感染死亡。尤其對于5歲以下兒童,瘧疾仍是他們寶貴生命的巨大威脅,平均每兩分鐘就有一名兒童死于瘧疾�；蛐揎椉夹g(shù)在瘧原蟲生物學研究中具有重要作用,如瘧原蟲基因功能研究,特別是由于瘧原蟲感染的種屬特異性,人類瘧原蟲不能感染模型動物,故在抗瘧藥、瘧疾疫苗及抗藥性的研究需要以動物瘧原蟲感染實驗動物建立模型進行體內(nèi)研究。雖然通常使用的嚙齒類動物瘧原蟲與人類瘧原蟲如惡性瘧原蟲在生物學與藥物敏感性等方面都有著高度的相似性,但兩者的基因組編碼的同一基因在序列上并不完全相同,且人類瘧原蟲表達的某些基因在嚙齒類動物瘧原蟲基因組中并不存在,這使得以嚙齒類動物瘧原蟲為模型進行藥物、抑制劑或者疫苗研究時得出的結(jié)果并不可靠。所以利用基因組修飾技術(shù)將人類瘧原蟲基因轉(zhuǎn)入到嚙齒類動物瘧原蟲基因組構(gòu)建動物模型對于瘧原蟲研究... 

【文章來源】：軍事科學院北京市

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

單交叉重組機制[52]

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（圖 1.2）；其中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過程主要是利用瘧原蟲在正常生命周期過程中，在有藥物篩選壓力和給與目的質(zhì)粒的情況下，有極低的幾率會發(fā)生同源重組，將目的基因整合到瘧原蟲中，以獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)基因蟲株[39,49-51]。但是這種傳統(tǒng)的方法有很多缺陷，比如實驗耗時長，使用的實驗動物多，人力物力財力都消耗巨大，且獲得成功轉(zhuǎn)染的概率小，得到的重組蟲株基因組序列復雜等。圖 1. 1 單交叉重組機制[52]

圖 1. 3 質(zhì)粒 pSGRNA-Cas9T2A-T7pol 模式圖粒 pDONOR（圖 1.4）：在質(zhì)粒 pT71.1-ccdB、質(zhì)粒 PL0035、質(zhì)粒 pmKate2pBART 的基礎上進行改造，構(gòu)建含有藥物篩選標記（hDHFR-yFcu）、同因模板的質(zhì)粒 pDONOR，在模板元件處我們引入了紅色熒光蛋白基2，幫助 mKate2 基因在伯氏瘧原蟲中表達的上下游非編碼區(qū)我們分別選擇aa 和 Pb.DHFS-FPGS-3UTR，由 T7 驅(qū)動藥物篩選基因（hDHFR-yFcu）的b.DHFR-TS 3’UTR 加強藥物篩選基因的表達，該質(zhì)�？蔀榘邢� DNA 雙鏈同源修復提供模板和可供于陽性重組瘧原蟲篩選的篩選標記。


本文編號：3220371