發(fā)布時間：2021-06-08 22:06

　　為了探索以衣殼蛋白為核心的病毒類疫苗靶向抗原在大腸桿菌中的表達策略,我們以豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）作為研究對象,用大腸桿菌表達系統(tǒng)表達了全長型PCV3衣殼蛋白（L蛋白）、N端截短型PCV3衣殼蛋白（NOR蛋白）、N端替換型PCV3衣殼蛋白（DL蛋白）以及逃逸表位替換型PCV3衣殼蛋白（DLCS蛋白）4種重組蛋白,觀察了4種重組蛋白的表達量及可溶性,并探究了DL蛋白和DLCS蛋白的免疫活性。本文的研究為病毒的衣殼蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)中的高效可溶性表達提供了一定的思路。 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

酶切位點設計圖

圖 2.2 重疊延伸 PCR 模式圖Fig 2.2 The pattern of SOE PCR（2）常規(guī) PCR 引物設計除了特殊的 PCR 反應，本課題中的實驗還涉及到常規(guī)的 PCR 引物設計。PCR 反應需要兩種引物，分別為 5’引物和 3’引物。引物設計的原則包括特異性與靈敏性，即引物能與靶 DNA 特異性地結合，而不與其他非目的 DNA 結合，并且 DNA 聚合酶能對引物進行有效的延伸。具體設計的步驟如下：1）選擇擴增的目的基因2）以正義鏈為設計模板，5’引物與 5’端的序列保持一致，3’引物為 3’端序列互補倒讀后的序列。3）用 Oligo 軟件進行引物分析，并根據(jù)分析結果進行優(yōu)化。分析要點包括：①引物 3’末端連續(xù)與模板嚴格互補配對的堿基至少為 8 個；②嘌呤、嘧啶隨機分布，避免出現(xiàn)堿基堆積現(xiàn)象；③GC 比值一般為 45-55%；④引物 3’端避開密碼子

圖 2.3 T-Vector pMD（Simple）圖譜Fig 2.3 The map of T-Vector pMD（Simple） T 載體的連接條件：16℃放置 30 min-1 h 或 16℃過夜。下：片段與表達載體（pET28a+）相連的限制性內切酶切割含有目的片段的質粒及 pET28a（+）T 載體 0.6 μL目的片段 A 4 μLSolutionⅠ 5 μLddH2O 0.4 μL總體積 10 μL

【參考文獻】：
期刊論文
[1]分子伴侶促進截短型人乳頭瘤病毒58亞型L1蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達[J]. 冉云偉,張改平,劉運超,陳玉梅,王聚財,孟鳳麗,王愛萍.  生物技術通訊. 2017(03)
[2]漆酶N端融合His-tag或S-tag標簽促進其在大腸桿菌中可溶性表達[J]. 岳青霞,張麗潔,田健,伍寧豐,姚冬生.  生物技術通報. 2016(03)

碩士論文
[1]大腸桿菌中重組蛋白可溶性表達的研究[D]. 蘇裕.華東師范大學 2007



本文編號：3219296