為了探索以衣殼蛋白為核心的病毒類疫苗靶向抗原在大腸桿菌中的表達(dá)策略,我們以豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）作為研究對(duì)象,用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了全長型PCV3衣殼蛋白（L蛋白）、N端截短型PCV3衣殼蛋白（NOR蛋白）、N端替換型PCV3衣殼蛋白（DL蛋白）以及逃逸表位替換型PCV3衣殼蛋白（DLCS蛋白）4種重組蛋白,觀察了4種重組蛋白的表達(dá)量及可溶性,并探究了DL蛋白和DLCS蛋白的免疫活性。本文的研究為病毒的衣殼蛋白在大腸桿菌系統(tǒng)中的高效可溶性表達(dá)提供了一定的思路。 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

酶切位點(diǎn)設(shè)計(jì)圖

圖 2.2 重疊延伸 PCR 模式圖Fig 2.2 The pattern of SOE PCR（2）常規(guī) PCR 引物設(shè)計(jì)除了特殊的 PCR 反應(yīng)，本課題中的實(shí)驗(yàn)還涉及到常規(guī)的 PCR 引物設(shè)計(jì)。PCR 反應(yīng)需要兩種引物，分別為 5’引物和 3’引物。引物設(shè)計(jì)的原則包括特異性與靈敏性，即引物能與靶 DNA 特異性地結(jié)合，而不與其他非目的 DNA 結(jié)合，并且 DNA 聚合酶能對(duì)引物進(jìn)行有效的延伸。具體設(shè)計(jì)的步驟如下：1）選擇擴(kuò)增的目的基因2）以正義鏈為設(shè)計(jì)模板，5’引物與 5’端的序列保持一致，3’引物為 3’端序列互補(bǔ)倒讀后的序列。3）用 Oligo 軟件進(jìn)行引物分析，并根據(jù)分析結(jié)果進(jìn)行優(yōu)化。分析要點(diǎn)包括：①引物 3’末端連續(xù)與模板嚴(yán)格互補(bǔ)配對(duì)的堿基至少為 8 個(gè)；②嘌呤、嘧啶隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)堿基堆積現(xiàn)象；③GC 比值一般為 45-55%；④引物 3’端避開密碼子

圖 2.3 T-Vector pMD（Simple）圖譜Fig 2.3 The map of T-Vector pMD（Simple） T 載體的連接條件：16℃放置 30 min-1 h 或 16℃過夜。下：片段與表達(dá)載體（pET28a+）相連的限制性內(nèi)切酶切割含有目的片段的質(zhì)粒及 pET28a（+）T 載體 0.6 μL目的片段 A 4 μLSolutionⅠ 5 μLddH2O 0.4 μL總體積 10 μL

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]分子伴侶促進(jìn)截短型人乳頭瘤病毒58亞型L1蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)[J]. 冉云偉,張改平,劉運(yùn)超,陳玉梅,王聚財(cái),孟鳳麗,王愛萍.  生物技術(shù)通訊. 2017(03)
[2]漆酶N端融合His-tag或S-tag標(biāo)簽促進(jìn)其在大腸桿菌中可溶性表達(dá)[J]. 岳青霞,張麗潔,田健,伍寧豐,姚冬生.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(03)

碩士論文
[1]大腸桿菌中重組蛋白可溶性表達(dá)的研究[D]. 蘇裕.華東師范大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3219296