目的制備E型沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein,MOMP）多克隆抗體,并在體外檢測(cè)其生物學(xué)特性。方法通過(guò)分子克隆方法構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET21a（+）/MOMP,轉(zhuǎn)化E.coli BL21（DE3）,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組MOMP蛋白,經(jīng)鎳螯合親和層析膠純化后,經(jīng)皮下多點(diǎn)注射免疫日本大耳白兔,制備兔多克隆抗體,分別采用ELISA和Western blot法檢測(cè)抗體的效價(jià)和特異性。在HeLa細(xì)胞中培養(yǎng)E血清型Ct,通過(guò)盧戈和吉姆薩染色法觀察細(xì)胞中Ct包涵體的形成情況,間接免疫熒光法檢測(cè)制備的MOMP多克隆抗體對(duì)Ct天然MOMP的結(jié)合特異性。結(jié)果 Ct MOMP可在原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá);制備的兔抗MOMP多克隆抗體ELISA效價(jià)可達(dá)1∶256 000,可特異性結(jié)合、識(shí)別融合及天然的Ct MOMP。結(jié)論制備的兔抗Ct MOMP多克隆抗體效價(jià)高、特異性強(qiáng),為后續(xù)進(jìn)一步研究Ct的致病機(jī)制及開(kāi)發(fā)新的免疫診斷制劑奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2020,33(09)CSCD

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【部分圖文】：

重組表達(dá)質(zhì)粒pET21a（+）/MOMP的雙酶切（NdeⅠ/XhoⅠ）鑒定

Western blot分析顯示，純化的重組MOMP蛋白可與兔抗MOMP多克隆抗體反應(yīng)，在相對(duì)分子質(zhì)量約40 000處出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)條帶，見(jiàn)圖4。表明制備的多克隆抗體可特異性識(shí)別MOMP重組蛋白。圖3 Ct MOMP兔血清抗體效價(jià)

Ct MOMP兔血清抗體效價(jià)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙眼衣原體主要外膜蛋白生物信息學(xué)分析[J]. 朱珊麗,尤孫武,婁崇潔,龔紅君,張麗芳.  溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2009(01)



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