發(fā)布時(shí)間：2017-04-18 12:23

  本文關(guān)鍵詞：間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在糖尿病動(dòng)物模型中的應(yīng)用及優(yōu)化措施的初探，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：糖尿病是嚴(yán)重危害人類健康的公共問(wèn)題,其患病率正逐年增加。糖尿病主要以胰島β細(xì)胞數(shù)量缺失、胰島素分泌缺陷引發(fā)高血糖紊亂為特征,故而尋找實(shí)現(xiàn)β細(xì)胞再生的途徑是目前糖尿病治療乃至糖尿病治愈的關(guān)鍵。間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一類具有無(wú)限自我復(fù)制能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,其系統(tǒng)輸注能夠刺激胰腺再生,從而有效改善糖尿病高血糖紊亂且主要通過(guò)分泌效應(yīng)發(fā)揮作用。前期研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基(Mesenchymal stem cells conditioned medium,MSC-CM)輸注治療糖尿病大鼠在短時(shí)間內(nèi)能夠引起受損胰腺組織中β細(xì)胞一定程度的再生,但是對(duì)糖尿病大鼠高血糖紊亂的改善能力有限,且具體的作用機(jī)制未明,值得深入探討。此外,許多文獻(xiàn)表明,MSCs經(jīng)過(guò)一定條件的預(yù)處理,能夠改變其分泌的基因譜,那么模擬糖尿病動(dòng)物體內(nèi)環(huán)境,對(duì)體外培養(yǎng)的MSCs進(jìn)行一定濃度的葡萄糖預(yù)處理,是否能進(jìn)一步提高M(jìn)SCs治療糖尿病的療效,從而初步探索MSCs優(yōu)化治療的可能?在本實(shí)驗(yàn)中,我們通過(guò)單次大劑量(65mg/kg)腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)建立糖尿病動(dòng)物模型,將提取的MSC-CM經(jīng)10倍超濾濃縮后輸注至糖尿病大鼠,根據(jù)糖尿病大鼠血清學(xué)指標(biāo)變化趨勢(shì)評(píng)估其胰島功能的恢復(fù)情況,根據(jù)動(dòng)物胰腺組織免疫熒光染色結(jié)果評(píng)估胰腺內(nèi)β細(xì)胞的再生能力,并通過(guò)胰腺內(nèi)細(xì)胞增殖指標(biāo)的免疫熒光染色結(jié)果對(duì)β細(xì)胞再生的可能機(jī)制進(jìn)行探討。此外,我們模擬糖尿病動(dòng)物體內(nèi)高糖環(huán)境對(duì)UC-MSCs分別進(jìn)行200mg/dl,250mg/dl,350mg/dl和450 mg/dl不同濃度葡萄糖預(yù)處理,檢測(cè)細(xì)胞增殖狀態(tài),并于一定濃度葡萄糖預(yù)處理24h,48h,72h后檢測(cè)衰老相關(guān)因子p16及生長(zhǎng)因子VEGF、IGF-1、HGF、FGFs基因表達(dá)譜和蛋白含量的變化,以確定合適的預(yù)處理糖濃度及預(yù)處理時(shí)間,并將經(jīng)高糖預(yù)處理的MSCs(HG-MSCs)輸注至糖尿病大鼠,評(píng)估高糖預(yù)處理對(duì)MSCs治療效果的提升,初步探索干細(xì)胞治療優(yōu)化的措施。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):(1)超濾濃縮MSC-CM治療糖尿病大鼠,在治療早期(7天)可明顯改善糖尿病大鼠的高糖狀態(tài),促進(jìn)血清胰島素及C肽的分泌,并增加β細(xì)胞數(shù)量。細(xì)胞增殖指標(biāo)的免疫熒光染色結(jié)果顯示,MSCCM治療早期(7天)Insulin/ki67雙陽(yáng)細(xì)胞明顯增多,提示β細(xì)胞增殖增加;(2)250mg/dl葡萄糖濃度對(duì)UC-MSCs預(yù)處理可明顯降低衰老相關(guān)因子p16的表達(dá),并上調(diào)FGF19和FGF21的基因水平,增加FGF19和FGF21的蛋白含量。與未經(jīng)處理的干細(xì)胞相比,經(jīng)250mg/dl葡萄糖預(yù)處理72h的MSCs能進(jìn)一步改善糖尿病大鼠的高血糖紊亂,更有效促進(jìn)胰島功能的恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)證實(shí),超濾濃縮MSC-CM輸注糖尿病動(dòng)物能夠通過(guò)提高β細(xì)胞增殖率引起胰腺細(xì)胞再生而發(fā)揮治療效應(yīng);當(dāng)預(yù)處理葡萄糖濃度為250mg/dl,預(yù)處理時(shí)間為72h時(shí),UC-MSCs衰老被抑制,分泌譜明顯改善,進(jìn)一步提升了UC-MSCs治療糖尿病的療效。本實(shí)驗(yàn)為MSCs治療糖尿病提供了新的理論支持,通過(guò)高糖預(yù)處理優(yōu)化MSCs為提高治療糖尿病的療效提供了一種新方式。
【關(guān)鍵詞】：MSC-CM β細(xì)胞增殖 糖尿病 MSCs 高糖預(yù)處理
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.1;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-17
• 結(jié)果17-20
• 附表20-21
• 附圖21-25
• 討論25-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-36
• 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)分泌效應(yīng)治療糖尿病36-46
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 致謝46-47
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷47

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本文編號(hào)：314901