背景和目的血管平滑肌細(xì)胞（VSMCs）異常增殖是高血壓、動脈粥樣硬化等血管重構(gòu)性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。研究清楚誘導(dǎo)VSMCs異常增殖的因素和機(jī)制,對防治該類疾病有著重要的理論意義和科學(xué)價(jià)值。自噬是真核生物在應(yīng)激狀態(tài)下維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的一種自我保護(hù)機(jī)制。自噬參與了多種細(xì)胞因子、血管活性物質(zhì)、剪切應(yīng)力、nc RNA等誘導(dǎo)的VSMCs增殖,一些調(diào)節(jié)哺乳動物細(xì)胞自噬的信號通路（如PI3K/AKT/m TOR）同時(shí)也是調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的重要信號通路。血管緊張素Ⅱ作為誘導(dǎo)VSMCs SS異常增殖的主要生物活性因子之一,通過氧化應(yīng)激和JAK2-STAT3、p38MAPK、PI3K/AKt等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路促進(jìn)VSMCs增殖。最新研究發(fā)現(xiàn),AngⅡ可通過氧化應(yīng)激和Rho A/Rho Kinase（ROCK）信號途徑誘導(dǎo)VSMCs自噬。mi R-17-5p通過負(fù)向靶向調(diào)節(jié)STAT3,誘導(dǎo)低氧條件下的自噬發(fā)揮抗VSMCs SS凋亡作用。因此,本課題擬以人主動脈平滑肌細(xì)胞為研究對象,應(yīng)用分子生物學(xué)方法探討AngⅡ誘導(dǎo)STAT3信號通路對自噬的調(diào)節(jié)以及自噬對VSMCs增殖的影響,為闡明血管重構(gòu)性疾病的病理生... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

研究假說圖

圖 4.1 AngⅡ處理濃度和時(shí)間對 LC3B -Ⅱ、Beclin1 和 p62 蛋白表達(dá)的影響不同濃度 AngⅡ處理 VSMCs 24 小時(shí)和 10-7mol/LAngⅡ處理 VSMCs 不同時(shí)間，Western blot法檢測 Beclin1（A）、LC3B-Ⅱ（B）、p62 的表達(dá)量（C）。*P<0.05 vs 0 mol/L；**P <0.01vs 0mol/L；**P <0.01 vs 0 mol/L；***P <0.001vs 0 mol/L；# #P <0.01vs 10-7mol/L，n=3。4.2 AngⅡ促進(jìn) VSMCsS 自噬流的產(chǎn)生取對數(shù)生長期 VSMCs，用 50μM chloroquine 預(yù)處理 30min，再用 10-7mol/LAngⅡ孵育 24h 后，Western blot 法檢測 LC3B-II 表達(dá)水平。結(jié)果顯示，chloroquine的預(yù)處理使 VSMCs 基礎(chǔ)的 LC3B-II 水平升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）（圖11

圖 4.2 氯喹預(yù)處理對 LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ轉(zhuǎn)化率的影響用 50μM chloroquine 預(yù)處理 30min，再用 10-7mol/LAngⅡ孵育 VSMCs 24h，Western blot 法檢測 LC3-Ⅱ表達(dá)量。**P <0.01 vs control group；#P <0.05 vs AngⅡ group，n=3。4.3AngⅡ誘導(dǎo)的自噬促進(jìn) VSMCs 增殖4.3.1AngⅡ促進(jìn) VSMCs 增殖取對數(shù)生長期 VSMCs，用不同濃度 AngⅡ（10-10mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L）孵育 VSMCs 24 小時(shí)以及用 10-7mol/LAngⅡ孵育 VSMCs不同時(shí)間（0h、6h、12h、24h、36h），Western blot 法檢測增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）表達(dá)水平。結(jié)果顯示，在 10-10～10-7mol/L 的濃度范圍內(nèi)，PCNA 表達(dá)量呈 AngⅡ濃度依賴性地上調(diào)，從 10-10mol/L 濃度開始上升明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）（圖 4.3 A）。與 10-7mol/L 相比，10-6mol/LAngⅡ使 PCNA 表達(dá)減少；在 0-24h的時(shí)間范圍內(nèi) PCNA 表達(dá)量呈時(shí)間依賴性地增加，從 6h 開始上升顯著，具有統(tǒng)

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3122323