目的:旨在探索Ⅰ型日本乙型腦炎病毒傳代致弱后基因組突變NS2A-C60A對乙腦病毒生物學特性的影響。方法:首先通過對傳代致弱及原始乙腦毒株基因組序列進行測序比對、結構預測分析并利用Western blotting（WB）確定了目標研究位點NS2A-C60A;然后使用反向遺傳定點突變技術構建拯救了包含NS2A-C60A單點突變的病毒株;最后利用噬斑形態(tài)觀察、生長曲線、雙螢光素酶分析,WB以及炎性因子檢測和動物實驗研究了該單點突變對于乙腦病毒生物學特性的影響。結果:首次研究發(fā)現(xiàn)Ⅰ型乙腦病毒傳代致弱會導致NS1’蛋白表達的顯著下降以及可能的相關位點NS2A-C60A,并成功拯救獲得了NS2A-C60A單點突變毒株r JEV-C60A,研究發(fā)現(xiàn)NS2AC60A突變對乙腦病毒的生長特性及噬斑形成沒有顯著影響,但是能夠顯著降低乙腦病毒NS1’蛋白的表達,并且該位點突變能夠輕微阻礙乙腦病毒對細胞炎性因子表達的抑制,動物實驗結果顯示NS2A-C60A點突變病毒與原毒株具有相似的神經毒力,說明該位點突變不是影響乙腦病毒毒力致弱的關鍵位點。結論:新發(fā)現(xiàn)的NS2A-C60A位點突變能夠顯著減少乙腦病毒NS1... 

【文章來源】：中國生物工程雜志. 2020,40(09)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

確定目標研究位點NS2A-C60A結果圖

細胞病變觀察以及PCR測序鑒定結果證實我們成功拯救獲得了NS2A-C60A單點突變乙腦病毒，將其命名為r JEV-C60A。2.3 r JEV-C60A點突變病毒相關生物學特征研究

(1)雙螢光素酶分析結果。雙螢光素酶分析結果顯示NS2A-C60A點突變會導致較低的雙螢光素酶活性，暗示該點突變會顯著降低NS1"蛋白的表達水平(圖5)。圖4 原始毒株r JEV-WT與單點突變毒株r JEV-C60A的生長曲線檢測結果圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]蝙蝠作為流行性乙型腦炎病毒宿主的研究[J]. 張海林,張云智,黃文麗,米竹青,龔鶴琴,楊衛(wèi)紅,施華芳,自登云,李兆祥,王靜林,章域震,龔正達,袁慶虹,馮錫光.  動物醫(yī)學進展. 2002(05)
[2]云南省乙型腦炎病毒宿主和媒介研究[J]. 張海林,自登云,龔正達.  中國預防獸醫(yī)學報. 2000(02)



本文編號：3116994