目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7對血管平滑肌細胞增殖、凋亡、遷移及細胞外基質(zhì)降解的影響。方法:生物信息學預測靶向關系,熒光素實驗進一步驗證靶向關系,RT-PCR檢測miR-33a-5p和SMAD7的表達,CCK-8法檢測VSMC的增殖,流式檢測細胞凋亡,劃痕實驗檢測細胞遷移,Western blot檢測Ki67、PCNA、Caspase-3、 Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表達水平。結果:PDGF-bb處理能夠增強血管平滑肌細胞增殖,抑制miR-33的表達;miR-33a-5p與SMAD7在3′UTR區(qū)存在結合位點,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p過表達抑制SMAD7的表達;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb誘導的血管平滑肌細胞增殖、下調(diào)增殖標記蛋白PCNA和Ki67表達,促進細胞凋亡、上調(diào)凋亡標記蛋白Caspase-3和Caspase-9的表達,降低傷口愈合率、抑制細胞遷移,下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達（P<0.01）。結論:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb誘導的血管平滑肌... 

【文章來源】：中國免疫學雜志. 2020,36(13)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

Western blot檢測MMP-2和MMP-9的表達水平

通過Western blot檢測SMD7蛋白表達水平發(fā)現(xiàn):與對照組相比,miR-33a-5p mimic組VSMCs細胞SMAD7蛋白表達明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖3B),SMAD7組VSMCs細胞SMAD7蛋白表達明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖3B);mimic+SMAD7 組VSMCs細胞SMAD7表達比miR-33a-5p mimic組明顯上調(diào)、比SMAD7組明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖3B)。2.4 miR-33a-5p靶向SMAD7抑制VSMCs細胞增殖

與對照組相比,miR-33a-5p mimic組VSMCs細胞增殖明顯減弱,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖4A),SMAD7組VSMCs細胞增殖明顯增強,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖4A);mimic+SMAD7 組VSMCs細胞增殖比miR-33a-5p mimic組明顯增強、比SMAD7組明顯減弱,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01,圖4A)。圖3 miR-33a-5p和SMD7表達水平

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Smad7基因過表達的促增殖作用機制探討[J]. 霍艷英,張開泰,李邦印,徐勤枝,段瑞峰,胡迎春,項曉瓊,李剛,吳德昌.  中華腫瘤雜志. 2004(09)



本文編號：3114780