目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及細(xì)胞外基質(zhì)降解的影響。方法:生物信息學(xué)預(yù)測靶向關(guān)系,熒光素實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證靶向關(guān)系,RT-PCR檢測miR-33a-5p和SMAD7的表達(dá),CCK-8法檢測VSMC的增殖,流式檢測細(xì)胞凋亡,劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移,Western blot檢測Ki67、PCNA、Caspase-3、 Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:PDGF-bb處理能夠增強(qiáng)血管平滑肌細(xì)胞增殖,抑制miR-33的表達(dá);miR-33a-5p與SMAD7在3′UTR區(qū)存在結(jié)合位點(diǎn),miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p過表達(dá)抑制SMAD7的表達(dá);miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖、下調(diào)增殖標(biāo)記蛋白PCNA和Ki67表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞凋亡、上調(diào)凋亡標(biāo)記蛋白Caspase-3和Caspase-9的表達(dá),降低傷口愈合率、抑制細(xì)胞遷移,下調(diào)MMP-2和MMP-9的表達(dá)（P<0.01）。結(jié)論:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb誘導(dǎo)的血管平滑肌... 

【文章來源】：中國免疫學(xué)雜志. 2020,36(13)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Western blot檢測MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平

通過Western blot檢測SMD7蛋白表達(dá)水平發(fā)現(xiàn):與對(duì)照組相比,miR-33a-5p mimic組VSMCs細(xì)胞SMAD7蛋白表達(dá)明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖3B),SMAD7組VSMCs細(xì)胞SMAD7蛋白表達(dá)明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖3B);mimic+SMAD7 組VSMCs細(xì)胞SMAD7表達(dá)比miR-33a-5p mimic組明顯上調(diào)、比SMAD7組明顯下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖3B)。2.4 miR-33a-5p靶向SMAD7抑制VSMCs細(xì)胞增殖

與對(duì)照組相比,miR-33a-5p mimic組VSMCs細(xì)胞增殖明顯減弱,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖4A),SMAD7組VSMCs細(xì)胞增殖明顯增強(qiáng),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖4A);mimic+SMAD7 組VSMCs細(xì)胞增殖比miR-33a-5p mimic組明顯增強(qiáng)、比SMAD7組明顯減弱,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01,圖4A)。圖3 miR-33a-5p和SMD7表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Smad7基因過表達(dá)的促增殖作用機(jī)制探討[J]. 霍艷英,張開泰,李邦印,徐勤枝,段瑞峰,胡迎春,項(xiàng)曉瓊,李剛,吳德昌.  中華腫瘤雜志. 2004(09)



本文編號(hào)：3114780