組蛋白翻譯后修飾是表觀遺傳調(diào)控的一種重要方式,通過作用于蛋白DNA親和力進而影響基因轉(zhuǎn)錄、DNA復制、DNA損傷修復等多個細胞進程。組蛋白修飾能夠調(diào)節(jié)染色質(zhì)結(jié)構(gòu),而其發(fā)揮作用的主要方式是通過與具有組蛋白識別結(jié)構(gòu)域的效應蛋白結(jié)合,我們稱這些蛋白質(zhì)為組蛋白識別蛋白。這一類具有識別功能的結(jié)構(gòu)域越來越多的被人們所認識和發(fā)現(xiàn),比如PHD結(jié)構(gòu)域、TUDOR結(jié)構(gòu)域、WD40結(jié)構(gòu)域、Chromo結(jié)構(gòu)域等。組蛋白密碼通過其識別蛋白被識別和解讀,進而向其下游傳遞信息而產(chǎn)生效應。PHF1就是一個已發(fā)現(xiàn)的組蛋白識別蛋白,它能夠解讀組蛋白翻譯后修飾的信息,并借此參與到基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程中。PHF1具有一個TUDOR結(jié)構(gòu)域和兩個PHD鋅指結(jié)構(gòu)域,這些識別結(jié)構(gòu)域使其在表觀遺傳調(diào)控和維持基因組穩(wěn)定性中發(fā)揮重要的作用。研究表明,PHF1與PRC2復合物之間存在相互結(jié)合,能夠影響EZH2的甲基轉(zhuǎn)移酶活性,對組蛋白H3K27的甲基化水平和HOX基因的轉(zhuǎn)錄抑制產(chǎn)生影響。另外,PHF1的TUDOR結(jié)構(gòu)域能夠識別H3K36me3和H3tK27me3,證明了其組蛋白識別蛋白的功能,然而其另外兩個PHD鋅指結(jié)構(gòu)域的作用仍然不明確。在本... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

ZWesternblot免疫印跡法檢測免疫辛和沛徐徉品中PHF1相百作用的蛋白

天津醫(yī)科大學博士學位論文PRMT5/WDR77和CRL4B復合物相互結(jié)合為有機整體PRMT5、MEP50、MTA1、HDAC2等蛋白，提示PHF1可能與這些蛋白質(zhì)存在相互作用，結(jié)果如圖1-2所示。2.1.3免疫共沉淀檢測PHF1與多種調(diào)控復合物存在作用質(zhì)譜結(jié)果提示我們可能有其他很多蛋白質(zhì)與PHF1存在結(jié)合，比如CRL4B復合物、SIN3A復合物、NuRD復合物、PRMT5/WDR77復合物以及p160家族等。為了驗證PHF1與他們之間的結(jié)合作用，我們利用HEK 293T細胞的蛋白裂解液，通過免疫共沉淀實驗（co-IP）進行了檢測。我們首先用PHF1的特異性抗體進行免疫沉淀，通過Western blot電泳后，再分別利用上述其它蛋白的特異性抗體進行免疫印跡的檢測。另外，相反的，我們用這些蛋白的抗體進行免疫沉淀，經(jīng)過SDS PAGE電泳后，再用PHF1的特異抗體進行印跡檢測。結(jié)果都證明PHF1與這些調(diào)控復合物之間都存在相互結(jié)合。結(jié)果如圖1-3所示。

天津醫(yī)科大學博士學位論文PRMT5/WDR77和CRL4B復合物相互結(jié)合為有機整體2.2 PHF1、PRMT5/WDR77和CRL4B復合物存在相互作用2.2.1 PRMT5/WDR77與CRL4B復合物之間存在相互作用在我們驗證出的PHF1結(jié)合的諸多復合物中，我們發(fā)現(xiàn)PRMT5/WDR77和CRL4B之間可能存在結(jié)合。CRL4B復合物是由CUL4B，DDB1和ROC1組成的E3泛素連接酶復合物，有報道DDB1會參與形成一種DWD Box模體（DDB1-binding WD40 protein）的結(jié)構(gòu)[71]，即DDB1對于WD40重復結(jié)構(gòu)域具有結(jié)合作用。巧合的是，PRMT5的酶活組分WDR77（又名MEP50或p44）正是一個具有WD40重復結(jié)構(gòu)域的蛋白。為了驗證這兩種復合物是否存在相互作用，我們利用HEK 293T細胞裂解液，通過免疫共沉淀的方法檢測兩者的結(jié)合結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論是用CRL4B復合物組分的特異抗體還是用PRMT5/WDR77蛋白的抗體進行免疫沉淀，都能夠通過免疫印跡檢測到其他的幾種蛋白，說明這兩種復合物之間存在相互作用。結(jié)果如圖1-4所示。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Reduced expression of E-cadherin/catenin complex in hepatocellular carcinomas[J]. Bo Zhai, Department of Ultrasonic Intervention, Eastern Hepatobiliary Surgery Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China He-Xin Yan, Shu-Qin Liu, Lei Chen, Meng-Chao Wu, Hong-Yang Wang, International Cooperation Laboratory on Signal Transduction, Eastern Hepatobilliary Surgery Institute, Second Military Medical University, Shanghai 200438, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(37)



本文編號：3101905