目的探討胃饑餓素（ghrelin）對(duì)HK-2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧的保護(hù)作用及機(jī)制。方法以HK-2細(xì)胞為研究對(duì)象,建立缺氧/復(fù)氧模型,模擬腎缺血再灌注損傷過(guò)程。胃饑餓素預(yù)處理后,采用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同質(zhì)量濃度胃饑餓素（0,12.5,25,50,100,200,400,800,1 600 ng/m L）對(duì)缺氧/復(fù)氧及正常HK-2細(xì)胞活力的影響。將細(xì)胞分為正常對(duì)照組（N組）,缺氧/復(fù)氧損傷組（H/R組）,胃饑餓素（400 ng/m L）預(yù)處理組+缺氧/復(fù)氧損傷組（ghrelin+H/R組）。造模成功后,采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記（TUNEL）試劑盒檢測(cè)細(xì)胞凋亡,蛋白質(zhì)印跡法（WB）檢測(cè)各組細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）及磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（p-ERK）、P38促分裂素原活化蛋白激酶（P38）及磷酸化P38促分裂素原活化蛋白激酶（p-P38）的表達(dá)。結(jié)果缺氧4 h,復(fù)氧12 h能有效誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型;與胃饑餓素質(zhì)量濃度為0 ng/m L時(shí)相比,質(zhì)量濃度為12.5,25,50 ng/m L時(shí)對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷的HK-2細(xì)胞無(wú)影響;胃饑餓素質(zhì)量濃度為100,200,400,800 ... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)藥業(yè). 2020,29(15)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷模型的建立

CCK-8試驗(yàn)結(jié)果表明，采用質(zhì)量濃度為12.5,25,50 ng/m L的胃饑餓素預(yù)處理2 h后，對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷的HK-2細(xì)胞無(wú)明顯影響。但胃饑餓素質(zhì)量濃度為100,200,400,800 ng/mL預(yù)處理能有效提高細(xì)胞活力(P<0.01)，且當(dāng)質(zhì)量濃度為1 600 ng/mL時(shí)，HK-2細(xì)胞的活力開(kāi)始降低，表明胃饑餓素質(zhì)量濃度為1 600 ng/mL時(shí)不利于HK-2細(xì)胞的生存。詳見(jiàn)圖2。為進(jìn)一步驗(yàn)證胃饑餓素對(duì)正常HK-2細(xì)胞的影響，將不同質(zhì)量濃度的胃饑餓素加入正常HK-2細(xì)胞中，且置正常培養(yǎng)箱(37℃，5%CO2)孵育16 h。每孔加入新鮮配制的含10μL的毒性檢測(cè)液CCK-8，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育3 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的吸光度，結(jié)果見(jiàn)圖3�？梢�(jiàn)，質(zhì)量濃度為12.5,25,50,100,200,400 ng/mL的胃饑餓素均不影響HK-2細(xì)胞的生長(zhǎng)，但胃饑餓素質(zhì)量濃度為800,1 600 ng/mL時(shí)，HK-2細(xì)胞的活力顯著降低(P<0.05)。表明胃饑餓素質(zhì)量濃度大于800 ng/mL不利于HK-2細(xì)胞的生存。

為進(jìn)一步驗(yàn)證胃饑餓素對(duì)正常HK-2細(xì)胞的影響，將不同質(zhì)量濃度的胃饑餓素加入正常HK-2細(xì)胞中，且置正常培養(yǎng)箱(37℃，5%CO2)孵育16 h。每孔加入新鮮配制的含10μL的毒性檢測(cè)液CCK-8，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育3 h，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm波長(zhǎng)處的吸光度，結(jié)果見(jiàn)圖3�？梢�(jiàn)，質(zhì)量濃度為12.5,25,50,100,200,400 ng/mL的胃饑餓素均不影響HK-2細(xì)胞的生長(zhǎng)，但胃饑餓素質(zhì)量濃度為800,1 600 ng/mL時(shí)，HK-2細(xì)胞的活力顯著降低(P<0.05)。表明胃饑餓素質(zhì)量濃度大于800 ng/mL不利于HK-2細(xì)胞的生存。2.3 對(duì)缺氧/復(fù)氧損傷的HK-2細(xì)胞凋亡的影響


本文編號(hào)：3091902