發(fā)布時(shí)間：2021-03-19 19:52

　　目的:從腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（BDNF）/酪氨酸激酶受體B（TrkB）信號(hào)通路研究烏頭湯對(duì)神經(jīng)病理性疼痛模型小鼠的神經(jīng)元保護(hù)作用。方法:40只雄性ICR小鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham）,SNL模型組,烏頭湯組(126 mg·kg^-1),ANA-12+烏頭湯組。建立神經(jīng)病理性疼痛L5脊神經(jīng)結(jié)扎（SNL）小鼠模型,造模成功后,灌胃給藥10 d,腦立體定位注射BDNF/TrkB受體拮抗劑ANA-12(50 nmol·L^-1)7 d,免疫組化法檢測(cè)小鼠海馬BDNF,蛋白激酶B（Akt）,環(huán)磷酸腺苷（c AMP）反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）蛋白的表達(dá)。免疫熒光法觀察谷氨酸（Glu）和γ-氨基丁酸（GABA）神經(jīng)元變化。小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞分離于精準(zhǔn)孕18 d的胎鼠腦組織,分為正常組、甘氨酸處理組,ANA-12組(0.5 mmol·L^-1),ANA-12+甘氨酸組,ANA-12+烏頭湯組,ANA-12+烏頭湯+甘氨酸組,細(xì)胞免疫熒光法觀察原代神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化;海馬神經(jīng)元細(xì)胞分為正常組、甘氨酸處理組(200 mmol·L^-1

【文章來(lái)源】：中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2020,26(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

烏頭湯對(duì)小鼠海馬BDNF/Trk B通路中BDNF,CREB,Akt陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的影響(免疫組化，×400)

與正常組比較，甘氨酸處理組谷氨酸能神經(jīng)元的總樹(shù)突棘、粗短狀樹(shù)突棘、細(xì)小狀樹(shù)突棘和蘑菇狀樹(shù)突棘的數(shù)量均顯著增高，甘氨酸可誘導(dǎo)谷氨酸能神經(jīng)元的激活(P<0.01);與甘氨酸處理組比較，ANA-12組，ANA-12+甘氨酸組，ANA-12+烏頭湯組和ANA-12+烏頭湯+甘氨酸組中谷氨酸能神經(jīng)元的總樹(shù)突棘、粗短狀樹(shù)突棘、細(xì)小狀樹(shù)突棘和蘑菇狀樹(shù)突棘的數(shù)量均明顯下降(P<0.05,P<0.01)。見(jiàn)圖3，表3。3.3對(duì)小鼠海馬谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元平衡的影響

本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建NP經(jīng)典模型SNL和海馬定位注射ANA-12，通過(guò)正、反方向來(lái)明確BDNF/Trk B通路對(duì)烏頭湯聯(lián)治療作用的影響。結(jié)果顯示，在SNL小鼠中BDNF,Akt及CREB的表達(dá)量較假手術(shù)組均顯著降低，烏頭湯對(duì)上述分子的表達(dá)量均有顯著地改善，而海馬定位注射ANA-12后僅有CREB的表達(dá)量受到顯著抑制，而Akt的表達(dá)量未受到顯著影響。海馬內(nèi)谷氨酸和氨基丁酸能神經(jīng)元的平衡對(duì)維持機(jī)體的平衡至關(guān)重要[17-18]，通過(guò)免疫熒光，觀察海馬內(nèi)谷氨酸、氨基丁酸能神經(jīng)元修復(fù)的比例。結(jié)果顯示，烏頭湯聯(lián)可緩解SNL小鼠中谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元的失衡，拮抗BDNF/Trk B通路后烏頭湯聯(lián)失去了調(diào)控作用。以上結(jié)果表明，烏頭湯聯(lián)可通過(guò)調(diào)控BDNF/Trk B-CREB通路來(lái)調(diào)節(jié)谷氨酸-氨基丁酸能神經(jīng)元的失衡，從而達(dá)到NP的治療效果。在體外培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元，通過(guò)統(tǒng)計(jì)在突觸信號(hào)傳遞中發(fā)揮重要作用的PSD95[19]表達(dá)量和樹(shù)突棘[20-21]的數(shù)量，探究BDNF/Trk B通路在烏頭湯聯(lián)對(duì)小鼠海馬原代神經(jīng)元興奮性和可塑性的影響。課題組前期研究顯示，SNL小鼠海馬區(qū)中過(guò)度激活的小膠質(zhì)細(xì)胞會(huì)持續(xù)釋放TNF-α，從而造成神經(jīng)元的興奮性損傷，而烏頭湯對(duì)TNF-α直接誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷具有良好的緩解效果[11]。本研究通過(guò)細(xì)胞給TNF-α來(lái)構(gòu)建細(xì)胞模型，顯示烏頭湯聯(lián)可通過(guò)激活甘氨酸增加PSD95在初、次級(jí)神經(jīng)元的表達(dá)量和增多樹(shù)突棘數(shù)量，而轉(zhuǎn)染BDNF-siRNA質(zhì)粒，CREB-siRNA質(zhì)粒后和ANA-12給藥后，烏頭湯聯(lián)失去了對(duì)PSD95和樹(shù)突棘的調(diào)控作用。表明烏頭湯聯(lián)可通過(guò)對(duì)BDNF/Trk B-CREB通路的調(diào)控來(lái)緩解原代神經(jīng)元興奮性及可塑性損傷，促進(jìn)神經(jīng)修復(fù)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]烏頭湯調(diào)控海馬BDNF/Trk B通路以緩解神經(jīng)病理性疼痛的痛共情緒癥狀[J]. 吳紅艷,師鈺琪,朱春燕,林娜.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2020(01)

碩士論文
[1]烏頭湯治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥效學(xué)及作用機(jī)理研究[D]. 陳少珍.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3090133