目的:溶血磷脂酰膽堿（lysophosphatidylcholine,LPC）是磷脂酶A₂水解磷脂酰膽堿后產(chǎn)生的,是一種可在病理狀態(tài)下產(chǎn)生的具有生物活性的脂質(zhì)。LPC可破壞細(xì)胞膜的完整性,并可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而,LPC是否可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡,國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本課題主要通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)探討LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響,同時(shí)觀察自噬在LPC誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞凋亡中的作用。方法:用MTT法檢測(cè)LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞活性的影響;用氧化應(yīng)激檢測(cè)試劑盒檢測(cè)LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞氧化應(yīng)激的影響;分別用Western blot和Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞凋亡的影響;用Western blot檢測(cè)LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞自噬的影響。結(jié)果:用不同濃度的LPC（0,2.5,5,10,20,40,80,160μM）處理小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞48 h,MTT結(jié)果顯示,2.5,5和10μM濃度的LPC可顯著抑制TM3細(xì)胞活性,而20,40,80,160μM濃度的LPC抑制TM3細(xì)胞活性則更顯著（P&l... 

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LPC對(duì)小鼠睪丸間質(zhì)TM3細(xì)胞活性的影響

第 3 章 結(jié)果的 TM3 細(xì)胞接種至 10 cm 細(xì)胞培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng) 24 h 使細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，分別用 0, 2.5, 5, 10 μM 濃度的 LPC 作用細(xì)胞 48 h ，然后用細(xì)胞刮收集細(xì)胞并制成蛋白樣品，用 Western blot 檢測(cè)小鼠睪丸間質(zhì) TM3 細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白 Bax、Caspase-3、Caspase-8 和 Bcl-2 的表達(dá)。結(jié)果顯示，LPC 處理組中的 Bax、cleavedCaspase-3 和 cleaved Caspase-8 蛋白表達(dá)顯著增加，Bcl-2 蛋白含量則顯著下降；以上結(jié)果表明，LPC 可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì) TM3 細(xì)胞凋亡。（圖 2）

圖 3. LPC 對(duì)小鼠睪丸間質(zhì) TM3 細(xì)胞凋亡的影響. Effect of LPC on apoptosis of mouse Leydig TM3 cells. TM3 cells w), 2.5 (b), 5 (c), 10 (d) μM LPC for 48 h; then the annexin V-FITC（+）/P（I+）+）/PI（-） cells were counted by flow cytometry.PC 誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì) TM3 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激了明確 LPC 是否可使小鼠睪丸間質(zhì) TM3 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激，同濃度的 LPC（0, 2.5, 5, 10 μM）處理 TM3 細(xì)胞 48 h 后，收集激試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）的含 GSH-PX 和 SOD 的活性。與對(duì)照組相比，LPC 呈濃度依賴式地 含量，并增加 MDA 含量；LPC 還呈濃度依賴式地降低細(xì)胞內(nèi) 活性（圖 4）。以上結(jié)果表明，LPC 可誘導(dǎo)小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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