目的應(yīng)用miRNA芯片技術(shù)篩選壓應(yīng)力下人軟骨終板細(xì)胞中差異表達(dá)的miRNAs,研究與壓應(yīng)力相關(guān)的miR-22并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,探討其對(duì)靶基因MMP-1的調(diào)控。方法將6個(gè)月意外流產(chǎn)胎兒軟骨終板進(jìn)行軟骨終板細(xì)胞的分離、培養(yǎng)。將第2代軟骨細(xì)胞按實(shí)驗(yàn)要求種板培養(yǎng)并隨機(jī)分為加壓組與對(duì)照組。加壓組施加周期性壓力（5 MPa,6 h×5 d）,使用TRIzol法提取各組RNA,miRNA芯片檢測(cè)miRNA表達(dá)情況,然后用Realtime PCR（RT-PCR）對(duì)差異表達(dá)miR-22進(jìn)行驗(yàn)證。通過靶基因預(yù)測(cè)軟件預(yù)測(cè)MMP-1與miR-22基因的關(guān)系,miR-22 mimics脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞后通過RT-PCR進(jìn)一步驗(yàn)證。結(jié)果芯片掃描結(jié)果顯示加壓組miR-22下調(diào)明顯。RT-PCR檢測(cè)顯示壓應(yīng)力下人軟骨終板細(xì)胞miR-22表達(dá)顯著降低。miR-22 mimics轉(zhuǎn)染目標(biāo)細(xì)胞48 h后,miR-22的表達(dá)顯著增高,同時(shí)MMP-1基因表達(dá)顯著降低。結(jié)論壓應(yīng)力下miR-22異常表達(dá),miR-22可靶向負(fù)調(diào)控與軟骨終板細(xì)胞退變相關(guān)的MMP-1基因。 

【文章來源】：生物骨科材料與臨床研究. 2020,17(03)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

芯片聚類分析顯示miR-22表達(dá)顯著降低

TargetScan預(yù)測(cè)miR-22與MMP-1 3"UTR結(jié)合位點(diǎn)

RT-PCR檢測(cè)壓應(yīng)力下人軟骨終板細(xì)胞miR-22表達(dá)顯著降低（*表示<0.05)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]壓應(yīng)力對(duì)人軟骨終板細(xì)胞MMP-1、3、13和TIMP-1表達(dá)的影響研究[J]. 丁亮,唐果,薛鋒,肖海軍,何志敏,沈玉春.  生物骨科材料與臨床研究. 2018(01)



本文編號(hào)：3061412