目的:鑒于OmpR與傷寒沙門菌感染過程中各種應(yīng)激微環(huán)境下的毒力和生存能力密切相關(guān),本研究選取特定應(yīng)激微環(huán)境下的毒力相關(guān)基因?yàn)檠芯繉ο?旨在闡明在該應(yīng)激微環(huán)境下OmpR對其的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制,從而認(rèn)識OmpR是如何通過相關(guān)基因的表達(dá)控制傷寒沙門菌在特定應(yīng)激微環(huán)境下的毒力和生存能力,為了解傷寒沙門菌的感染和致病機(jī)制奠定一定的理論基礎(chǔ)。方法:1.OmpR基因缺失回補(bǔ)株的制備:構(gòu)建含有OmpR目的片段的重組載體,所用質(zhì)粒為p BAD33,將重組載體電轉(zhuǎn)入（35）OmpR,即可得OmpR基因缺失回補(bǔ)株（記為C-（35）OmpR）。同時(shí)將空載體p BAD33電轉(zhuǎn)入WT和（35）OmpR中作為相應(yīng)的對照株（分別記為WT-p BAD33和（35）OmpR-p BAD33）。2.生長曲線測定:以O(shè)D600數(shù)值作縱坐標(biāo),以時(shí)間作橫坐標(biāo),每隔1h檢測OD600值繪制生長曲線,觀測WT-p BAD、ΔOmpR-p BAD和C-ΔOmpR對數(shù)中期（OD600=0.8）時(shí)在酸應(yīng)激條件下的生長情況,以及WT、ΔOmpR和Δhfq在低滲條件下的生長情況。3.實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測基因轉(zhuǎn)錄水平:提取相應(yīng)菌株總RNA并逆轉(zhuǎn)錄... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組載體的測序結(jié)果比對Figure4.3BLASTanalysisofthesequencingresultoftherecombiantvector

OmpR 調(diào)控傷寒沙門菌毒力分子機(jī)制的初步研究 對傷寒沙門菌耐酸力的影響R 對傷寒沙門菌酸應(yīng)激條件下生長能力的影響定了野生對照株（WT-pBAD33）、缺陷對照株（ΔompC-ΔompR）在酸應(yīng)激后的生長曲線，結(jié)果如圖 4.6 所示：-pBAD33 的生長速率明顯快于 WT-pBAD33 的生長速率D33 的生長情況一致, 表明 ompR 的突變增強(qiáng)了酸應(yīng)激條

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文的 mRNA 水平與 WT-pBAD33 相比無明顯差異，酸應(yīng)激 45 min、90 min 時(shí)ΔompR-pBAD33 中 cadB 和 cadC mRNA 水平明顯高于 WT-pBAD3（3p 均<0.01），表明在酸應(yīng)激條件下 OmpR 能夠抑制 cadB 和 cadC 的轉(zhuǎn)錄。我們將含有 cadB、cadC 整個(gè)啟動子區(qū)域的重組 pHRP309 質(zhì)粒導(dǎo)入 WT 和ΔompR 中，通過 β-半乳糖苷酶的活性檢測研究 OmpR 對耐酸相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控關(guān)系，cadB 轉(zhuǎn)錄活性結(jié)果見圖 4.7（b）C，cadC 轉(zhuǎn)錄活性結(jié)果見圖 4.7（b）D：在 0 min 時(shí)（即未加入鹽酸時(shí)），ΔompR 的 β-半乳糖苷酶的活性與 WT 中相比無明顯差異；酸應(yīng)激 45 min 及 90 min 時(shí) ΔompR 中 β-半乳糖苷酶活性均明顯高于 WT 中 β-半乳糖苷酶活性（p 均<0.01），表明酸應(yīng)激條件下 OmpR 對 cadB、cadC 的轉(zhuǎn)錄具有負(fù)調(diào)控關(guān)系。


本文編號：3058857