近年來,由于臨床上對于抗生素的大量使用,使得許多的臨床病原菌產(chǎn)生了耐藥性,威脅著人們的健康。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是普遍存在于各種環(huán)境中已知的機會致病菌,能夠?qū)е箩t(yī)院內(nèi)獲得性感染。然而,由于銅綠假單胞菌自身所具有的環(huán)境適應(yīng)以及廣泛的耐藥性,使得對于銅綠假單胞菌的治療變得較為棘手。因此,了解和控制銅綠假單胞菌的感染是目前臨床研究中的一項重要課題。呼吸鏈對于細菌的生長和代謝過程至關(guān)重要,并且參與細菌的耐藥和致病性。呼吸鏈能夠作為一個新的靶點治療銅綠假單胞菌的感染。前期研究發(fā)現(xiàn)PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）對氨基糖苷類抗生素的抗性增加。同時,發(fā)現(xiàn)PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）和野生型PAO1相比,培養(yǎng)液顏色明顯變淺,推測基因PA4429、PA4430和PA4431可能影響綠膿菌素以及細菌的毒性。根據(jù)KEGG網(wǎng)站顯示,基因PA4429、PA4430和PA4431可能編碼細胞色素c1、細胞色素b以及鐵硫蛋白,三個基因一起構(gòu)成了細胞色素bc1復(fù)合體,與PA4427和PA4428構(gòu)成... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語對照表
第一章 緒論
    1.1 銅綠假單胞菌的致病性
        1.1.1 胞外毒性因子的產(chǎn)生
        1.1.2 細胞表面毒力因子的產(chǎn)生
        1.1.3 生物被膜的形成
    1.2 細菌的電子傳遞鏈
        1.2.1 細菌電子傳遞鏈的組成
        1.2.2 呼吸鏈的功能
    1.3 群體感應(yīng)系統(tǒng)（QUORUM SENSING）
        1.3.1 銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)的組成以及與致病性的關(guān)系
        1.3.2 群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控機制
    1.4 研究內(nèi)容和意義
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗所用菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗器材
        2.1.4 培養(yǎng)基和溶液的配置方法
    2.2 實驗方法
        2.2.1 同源序列比對
        2.2.2 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        2.2.3 普通PCR
        2.2.4 限制性內(nèi)切酶酶切和連接反應(yīng)
        2.2.5 大腸桿菌（DH10B）的感受態(tài)細胞的制備
        2.2.6 銅綠假單胞菌感受態(tài)的制備
        2.2.7 電轉(zhuǎn)化
        2.2.8 質(zhì)粒的小劑量提取
        2.2.9 DNA純化
        2.2.10 構(gòu)建敲除突變體
        2.2.11 互補菌株的構(gòu)建
        2.2.12 生長的檢測
        2.2.13 細菌菌落（CFU）檢測
        2.2.14 基因表達水平的檢測
        2.2.15 綠膿菌素的檢測
        2.2.16 用BCA法檢測蛋白濃度
        2.2.17 ATP產(chǎn)量的檢測
        2.2.18 PQS的提取
        2.2.19 鼠李糖脂的檢測
        2.2.20 胞外多糖的檢測
        2.2.21 彈性蛋白酶的檢測
        2.2.22 運動的檢測
        2.2.23 抗生素敏感性的檢測
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 基因PA4429-31生物信息學(xué)分析
        3.1.1 基因PA4429-31同源比對分析
        3.1.2 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    3.2 突變體和互補體的構(gòu)建
        3.2.1 敲除突變體PAO1（Δ4429-31）的構(gòu)建
        3.2.2 互補菌株的構(gòu)建
    3.3 基因PA4429-31對于ATP含量的影響
    3.4 基因PA4429-31對于生長的影響
    3.5 基因PA4429-31對抗生素抗性的影響
    3.6 基因PA4429-31對于毒力因子產(chǎn)量的影響
        3.6.1 基因PA4429-31對綠膿菌素的影響
        3.6.2 基因PA4429-31對彈性蛋白酶產(chǎn)量的檢測
        3.6.3 基因PA4429-31對胞外多糖的影響
        3.6.4 基因PA4429-31對鼠李糖脂的影響
    3.7 基因PA4429-31對運動的影響
    3.8 基因PA4429-31影響群體感應(yīng)系統(tǒng)
        3.8.1 基因PA4429-31對Las系統(tǒng)水平的影響
        3.8.2 基因PA4429-31對Rhl系統(tǒng)水平的影響
        3.8.3 基因PA4429-31對PQS系統(tǒng)的影響
第四章 討論
參考文獻
碩士期間的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]銅綠假單胞菌生物被膜研究進展[J]. 高珊,張哲倫,蘇杭,韓峰.  中國海洋藥物. 2018(05)
[2]銅綠假單胞菌堿性蛋白酶AprA及其抑制劑AprI的表達、純化和初步的活性驗證[J]. 曹潤,高亞萍,劉玉,劉成華,靳鵬,馬遠方,楊光.  軍事醫(yī)學(xué). 2016(12)
[3]銅綠假單胞菌致病機理及中藥抗感染的研究現(xiàn)狀[J]. 唐金鳳,李莉,左國營.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2016(05)
[4]銅綠假單胞菌群體感應(yīng)效應(yīng)系統(tǒng)細菌毒力調(diào)節(jié)的研究進展[J]. 陳雙紅,陳銳勇,徐雄利,肖衛(wèi)兵.  海軍醫(yī)學(xué)雜志. 2016(02)
[5]銅綠假單胞菌的致病性及耐藥性研究近況[J]. 楊君洋,盧洪洲.  內(nèi)科理論與實踐. 2016(02)



本文編號：3053739