近年來(lái),由于臨床上對(duì)于抗生素的大量使用,使得許多的臨床病原菌產(chǎn)生了耐藥性,威脅著人們的健康。銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是普遍存在于各種環(huán)境中已知的機(jī)會(huì)致病菌,能夠?qū)е箩t(yī)院內(nèi)獲得性感染。然而,由于銅綠假單胞菌自身所具有的環(huán)境適應(yīng)以及廣泛的耐藥性,使得對(duì)于銅綠假單胞菌的治療變得較為棘手。因此,了解和控制銅綠假單胞菌的感染是目前臨床研究中的一項(xiàng)重要課題。呼吸鏈對(duì)于細(xì)菌的生長(zhǎng)和代謝過(guò)程至關(guān)重要,并且參與細(xì)菌的耐藥和致病性。呼吸鏈能夠作為一個(gè)新的靶點(diǎn)治療銅綠假單胞菌的感染。前期研究發(fā)現(xiàn)PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）對(duì)氨基糖苷類抗生素的抗性增加。同時(shí),發(fā)現(xiàn)PAO1（Δ4429）、PAO1（Δ4430）、PAO1（Δ4431）和野生型PAO1相比,培養(yǎng)液顏色明顯變淺,推測(cè)基因PA4429、PA4430和PA4431可能影響綠膿菌素以及細(xì)菌的毒性。根據(jù)KEGG網(wǎng)站顯示,基因PA4429、PA4430和PA4431可能編碼細(xì)胞色素c1、細(xì)胞色素b以及鐵硫蛋白,三個(gè)基因一起構(gòu)成了細(xì)胞色素bc1復(fù)合體,與PA4427和PA4428構(gòu)成... 

【文章來(lái)源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 銅綠假單胞菌的致病性
        1.1.1 胞外毒性因子的產(chǎn)生
        1.1.2 細(xì)胞表面毒力因子的產(chǎn)生
        1.1.3 生物被膜的形成
    1.2 細(xì)菌的電子傳遞鏈
        1.2.1 細(xì)菌電子傳遞鏈的組成
        1.2.2 呼吸鏈的功能
    1.3 群體感應(yīng)系統(tǒng)（QUORUM SENSING）
        1.3.1 銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)的組成以及與致病性的關(guān)系
        1.3.2 群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控機(jī)制
    1.4 研究?jī)?nèi)容和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)所用菌株和質(zhì)粒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)器材
        2.1.4 培養(yǎng)基和溶液的配置方法
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 同源序列比對(duì)
        2.2.2 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        2.2.3 普通PCR
        2.2.4 限制性內(nèi)切酶酶切和連接反應(yīng)
        2.2.5 大腸桿菌（DH10B）的感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.6 銅綠假單胞菌感受態(tài)的制備
        2.2.7 電轉(zhuǎn)化
        2.2.8 質(zhì)粒的小劑量提取
        2.2.9 DNA純化
        2.2.10 構(gòu)建敲除突變體
        2.2.11 互補(bǔ)菌株的構(gòu)建
        2.2.12 生長(zhǎng)的檢測(cè)
        2.2.13 細(xì)菌菌落（CFU）檢測(cè)
        2.2.14 基因表達(dá)水平的檢測(cè)
        2.2.15 綠膿菌素的檢測(cè)
        2.2.16 用BCA法檢測(cè)蛋白濃度
        2.2.17 ATP產(chǎn)量的檢測(cè)
        2.2.18 PQS的提取
        2.2.19 鼠李糖脂的檢測(cè)
        2.2.20 胞外多糖的檢測(cè)
        2.2.21 彈性蛋白酶的檢測(cè)
        2.2.22 運(yùn)動(dòng)的檢測(cè)
        2.2.23 抗生素敏感性的檢測(cè)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 基因PA4429-31生物信息學(xué)分析
        3.1.1 基因PA4429-31同源比對(duì)分析
        3.1.2 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    3.2 突變體和互補(bǔ)體的構(gòu)建
        3.2.1 敲除突變體PAO1（Δ4429-31）的構(gòu)建
        3.2.2 互補(bǔ)菌株的構(gòu)建
    3.3 基因PA4429-31對(duì)于ATP含量的影響
    3.4 基因PA4429-31對(duì)于生長(zhǎng)的影響
    3.5 基因PA4429-31對(duì)抗生素抗性的影響
    3.6 基因PA4429-31對(duì)于毒力因子產(chǎn)量的影響
        3.6.1 基因PA4429-31對(duì)綠膿菌素的影響
        3.6.2 基因PA4429-31對(duì)彈性蛋白酶產(chǎn)量的檢測(cè)
        3.6.3 基因PA4429-31對(duì)胞外多糖的影響
        3.6.4 基因PA4429-31對(duì)鼠李糖脂的影響
    3.7 基因PA4429-31對(duì)運(yùn)動(dòng)的影響
    3.8 基因PA4429-31影響群體感應(yīng)系統(tǒng)
        3.8.1 基因PA4429-31對(duì)Las系統(tǒng)水平的影響
        3.8.2 基因PA4429-31對(duì)Rhl系統(tǒng)水平的影響
        3.8.3 基因PA4429-31對(duì)PQS系統(tǒng)的影響
第四章 討論
參考文獻(xiàn)
碩士期間的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3053739