目的:探討制備人間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell, MSC）來源的細胞外微囊（extracellular microvesicle, MV）的適宜條件。方法:無血清條件下培養(yǎng)人臍帶來源MSC,細胞融合達80%時,用基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)72 h后,收集培養(yǎng)細胞的上清,使用濃縮試劑濃縮細胞外微囊,經(jīng)流式細胞術(shù)及電子顯微鏡鑒定,以蛋白總量為微囊含量指標(biāo)。調(diào)整上清不同pH值,探測MV收獲量。去營養(yǎng)后,收集不同培養(yǎng)時間的培養(yǎng)上清,富集微囊并測定蛋白含量,確定不同培養(yǎng)時間微囊產(chǎn)量。結(jié)果:富集的細胞外微囊表達CD9、CD63和CD81,電子顯微鏡下微囊呈圓形,直徑在100 nm左右。使用微囊富集試劑盒收集、培養(yǎng)上清pH值分別為3,7和9時,每10⁷個MSC收獲的蛋白量分別為416.8±128.1、255.4±77.9和142.8±46.4μg,3組比較有明顯差異（P<0.05）。饑餓培養(yǎng)48、72和96 h,每10⁷個MSC收獲的蛋白量分別為173.6±44.5、262.4±49.6和364.2±37.8μg,3組存在顯著差異（P&... 

【文章來源】：中國實驗血液學(xué)雜志. 2020,28(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    試劑與儀器
    細胞培養(yǎng)
    MSC-MV的收集
    蛋白濃度測定
    MSC-MV細胞表面分子標(biāo)記物的流式細胞術(shù)檢測
    電子顯微鏡觀察MSC-MV
    統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié)果
    MSC-MV的鑒定
    上清pH值對收獲MSC-MV量的影響
    饑餓時間對MSC-MV收獲量的影響
討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]間充質(zhì)干細胞防治移植物抗宿主病的研究進展[J]. 王利,馬得勛,劉書鋒,高春記.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2019(01)
[2]人骨髓間充質(zhì)干細胞釋放膜微囊條件探索[J]. 畢曉云,黃舒,陳晶礪,王芳,王燕,郭子寬.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2014(02)
[3]間充質(zhì)干細胞來源微泡的研究進展[J]. 王曉慶,朱曉健,鄒萍.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2013(01)
[4]釋放膜微粒:間充質(zhì)干細胞治療的新機制[J]. 李志勇,郭子寬,郭志坤.  組織工程與重建外科雜志. 2012(03)
[5]間充質(zhì)干細胞臨床試驗中的問題及其解決策略[J]. 張薇薇,郭子寬,李占全.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2007(04)



本文編號：3047003