本文關(guān)鍵詞：重組抗體scFv的大腸桿菌表達(dá)、復(fù)性及對(duì)癌癥特異性抗原ccsp的活性檢測(cè)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單鏈抗體(single chain Fv)是用人工合成的15-20個(gè)氨基酸的短肽(Linker)將抗體重鏈可變區(qū)VH與輕鏈可變區(qū)VL基因連接起來(lái)而形成單一多肽鏈的重組蛋白,是具有完整抗原結(jié)合特異性的最小結(jié)構(gòu)功能單位。其相對(duì)分子量為25KD左右,大小僅為完整抗體的六分之一。因其分子量比較小,制備簡(jiǎn)單,穿透力強(qiáng),免疫原性低的特點(diǎn)而廣泛應(yīng)用于腫瘤的診斷和治療。本課題是在構(gòu)建好癌癥特異性抗原ccsp的單鏈抗體scFv-pET-11a表達(dá)載體的基礎(chǔ)上,期望獲得有檢測(cè)活性的scFv重組抗體。首先,我們將scFv-pET-11a表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)化入大腸桿菌E.coli BL21(DE3),并利用IPTG誘導(dǎo)scFv在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE凝膠電泳驗(yàn)證,顯示重組抗體scFv主要以包涵體形式表達(dá)。在對(duì)IPTG的誘導(dǎo)時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化之后,對(duì)獲取的大量scFv包涵體進(jìn)行復(fù)性,分別采用透析法、添加不同濃度復(fù)性促進(jìn)劑法和高蛋白濃度不連續(xù)添加復(fù)性劑三種復(fù)性方法進(jìn)行復(fù)性,高蛋白濃度不連續(xù)添加復(fù)性劑法獲得的scFv通過(guò)對(duì)癌癥特異性抗原ccsp利用Western blot進(jìn)行檢測(cè),并用ECL和AP兩種顯色方法顯色,顯示其具有一定的檢測(cè)活性和結(jié)合活性。此外,成功構(gòu)建了分泌型表達(dá)載體scFv-pET-22b為下一步直接獲得具有生物學(xué)活性的可溶性蛋白表達(dá)抗體奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：單鏈抗體scFv 包涵體 復(fù)性 Western Blot
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 緒論9-21
• 第一章 癌癥特異性抗原ccsp抗體scFv-pET-11a的原核表達(dá)21-33
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器21-25
• 二、實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 三、結(jié)果與分析27-31
• 四、討論31-33
• 第二章、重組抗體scFv的折疊復(fù)性及對(duì)癌癥特異性抗原ccsp的活性檢測(cè)33-44
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器33-36
• 二、實(shí)驗(yàn)方法36-41
• 三、結(jié)果與分析41-42
• 四、討論42-44
• 第三章 重組抗體scFv對(duì)癌癥特異性抗原ccsp的AP檢測(cè)及scFv-pET-22b載體構(gòu)建44-58
• 一、實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器44-46
• 二、實(shí)驗(yàn)方法46-51
• 三、結(jié)果與分析51-56
• 四、討論56-58
• 第四章、工作展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 已刊論文63-64
• 致謝64

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：304499