本文關鍵詞：重組抗體scFv的大腸桿菌表達、復性及對癌癥特異性抗原ccsp的活性檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單鏈抗體(single chain Fv)是用人工合成的15-20個氨基酸的短肽(Linker)將抗體重鏈可變區(qū)VH與輕鏈可變區(qū)VL基因連接起來而形成單一多肽鏈的重組蛋白,是具有完整抗原結合特異性的最小結構功能單位。其相對分子量為25KD左右,大小僅為完整抗體的六分之一。因其分子量比較小,制備簡單,穿透力強,免疫原性低的特點而廣泛應用于腫瘤的診斷和治療。本課題是在構建好癌癥特異性抗原ccsp的單鏈抗體scFv-pET-11a表達載體的基礎上,期望獲得有檢測活性的scFv重組抗體。首先,我們將scFv-pET-11a表達載體成功轉化入大腸桿菌E.coli BL21(DE3),并利用IPTG誘導scFv在大腸桿菌中進行表達,通過SDS-PAGE凝膠電泳驗證,顯示重組抗體scFv主要以包涵體形式表達。在對IPTG的誘導時間進行優(yōu)化之后,對獲取的大量scFv包涵體進行復性,分別采用透析法、添加不同濃度復性促進劑法和高蛋白濃度不連續(xù)添加復性劑三種復性方法進行復性,高蛋白濃度不連續(xù)添加復性劑法獲得的scFv通過對癌癥特異性抗原ccsp利用Western blot進行檢測,并用ECL和AP兩種顯色方法顯色,顯示其具有一定的檢測活性和結合活性。此外,成功構建了分泌型表達載體scFv-pET-22b為下一步直接獲得具有生物學活性的可溶性蛋白表達抗體奠定了基礎。
【關鍵詞】：單鏈抗體scFv 包涵體 復性 Western Blot
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要6-7
• ABSTRACT7-9
• 緒論9-21
• 第一章 癌癥特異性抗原ccsp抗體scFv-pET-11a的原核表達21-33
• 一、實驗材料、試劑與儀器21-25
• 二、實驗方法25-27
• 三、結果與分析27-31
• 四、討論31-33
• 第二章、重組抗體scFv的折疊復性及對癌癥特異性抗原ccsp的活性檢測33-44
• 一、實驗材料、試劑與儀器33-36
• 二、實驗方法36-41
• 三、結果與分析41-42
• 四、討論42-44
• 第三章 重組抗體scFv對癌癥特異性抗原ccsp的AP檢測及scFv-pET-22b載體構建44-58
• 一、實驗材料、試劑與儀器44-46
• 二、實驗方法46-51
• 三、結果與分析51-56
• 四、討論56-58
• 第四章、工作展望58-59
• 參考文獻59-63
• 已刊論文63-64
• 致謝64

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本文編號：304499