課題組前期發(fā)現(xiàn),大腸桿菌麥芽糖結(jié)合蛋白（maltose binding protein,MBP）具有免疫增強(qiáng)作用,尤其是當(dāng)MBP與卡介苗（BCG）聯(lián)合免疫小鼠后,能夠協(xié)同促進(jìn)Th1活化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),MBP可通過TLR2和TLR4信號誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向著M1型分化;通過TLR2/TLR4/TLR9 cross-talk直接誘導(dǎo)CD4⁺T細(xì)胞向Th1活化。樹突狀細(xì)胞（Dendritic cell,DC）作為體內(nèi)提呈功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞,在固有免疫應(yīng)答和適應(yīng)性免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮著舉足輕重的作用。然而,MBP聯(lián)合BCG對DC細(xì)胞的活化、成熟的影響并不清楚,以及通過DC細(xì)胞對CD4⁺T細(xì)胞的極化方向,尚未進(jìn)行探討。本研究為了探討MBP聯(lián)合BCG是否影響DC的成熟,免疫磁珠分選獲取純的DC細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子的表達(dá)。結(jié)果顯示,MBP聯(lián)合BCG協(xié)同上調(diào)DC細(xì)胞表面共刺激分子CD80、CD86及MHC-II分子的表達(dá),增加IL-12p70分泌水平,誘導(dǎo)DC細(xì)胞成熟、活化。為了探討MBP聯(lián)合BCG刺激能否通過DC... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 MBP增強(qiáng)免疫應(yīng)答的機(jī)制研究進(jìn)展
    1.2 BCG激活免疫細(xì)胞的機(jī)制與TLR有關(guān)
    1.3 Toll樣受體
        1.3.1 TLRs成員的分布與定位
        1.3.2 TLRs成員的配體和激動(dòng)劑
        1.3.3 TLRs和DC
    1.4 本課題設(shè)計(jì)思路及主要研究內(nèi)容
        1.4.1 本課題的設(shè)計(jì)思路
        1.4.2 本課題研究的具體內(nèi)容
        1.4.3 本課題的特色
第2章 MBP聯(lián)合BCG體外誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的成熟促進(jìn)TH1細(xì)胞活化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要試劑的配制
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 MBP的分離純化
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)體系建立
        2.2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子表達(dá)
        2.2.4 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12p70的分泌
+T細(xì)胞的共培養(yǎng)及增殖檢測">        2.2.5 DC細(xì)胞與CD4⁺T細(xì)胞的共培養(yǎng)及增殖檢測
+T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌">        2.2.6 ELISPOT檢測CD4⁺T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 DC細(xì)胞的純度鑒定
+T細(xì)胞的純度鑒定">        2.3.2 CD4⁺T細(xì)胞的純度鑒定
        2.3.3 MBP聯(lián)合BCG促進(jìn)DC共刺激分子和MHC-II分子的表達(dá)
        2.3.4 MBP聯(lián)合BCG促進(jìn)DC分泌IL-12
        2.3.5 MBP聯(lián)合BCG對DC誘導(dǎo)Th1活化的影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 MBP聯(lián)合BCG誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞成熟促進(jìn)TH1細(xì)胞活化的機(jī)制分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要試劑的配制
        3.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 主要實(shí)驗(yàn)方法
-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表達(dá)鑒定">        3.2.1 RT-PCR實(shí)驗(yàn)對TLR2^-/-、TLR4^-/-小鼠TLR2/TLR4的表達(dá)鑒定
        3.2.2 小鼠脾臟DC細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
+T細(xì)胞的分離與培養(yǎng)">        3.2.3 小鼠脾臟CD4⁺T細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測TLR2和TLR4表達(dá)
-/-、TLR4^-/-DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子表達(dá)">        3.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測TLR2^-/-、TLR4^-/-DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子表達(dá)
        3.2.6 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12p70的分泌
+T細(xì)胞的共培養(yǎng)及增殖檢測">        3.2.7 不同小鼠來源的DC細(xì)胞與CD4⁺T細(xì)胞的共培養(yǎng)及增殖檢測
        3.2.8 ELISPOT檢測CD4+ T與DC共培養(yǎng)的IFN-γ和IL-4 分泌
        3.2.9 ELISA實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-10 的分泌
        3.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞TLR2/TLR4表達(dá)的鑒定">        3.3.1 TLR2^-/-小鼠或TLR4^-/-小鼠脾臟單個(gè)核細(xì)胞TLR2/TLR4表達(dá)的鑒定
        3.3.2 MBP 聯(lián)合 BCG 促進(jìn) DC 細(xì)胞 TLR2 的表達(dá)
        3.3.3 MBP聯(lián)合BCG促進(jìn)DC細(xì)胞TLR4的表達(dá)
        3.3.4 TLR2對MBP聯(lián)合BCG促進(jìn)DC細(xì)胞CD80、CD86、MHC-II分子表達(dá)的影響
        3.3.5 TLR4對MBP聯(lián)合BCG促進(jìn)DC細(xì)胞CD80、CD86、MHC-II分子的表達(dá)
        3.3.6 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG刺激DC分泌IL-12p70的影響
+T細(xì)胞增殖的影響">        3.3.7 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG通過DC誘導(dǎo)CD4⁺T細(xì)胞增殖的影響
        3.3.8 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG通過DC誘導(dǎo)Th1活化的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)對樹突狀細(xì)胞的成熟作用及誘導(dǎo)TH1活化的機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 主要試劑的配制
        4.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 主要實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 MBP聯(lián)合BCG免疫小鼠的過程
        4.2.2 免疫小鼠脾臟DC細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
+T細(xì)胞的分離與培養(yǎng)">        4.2.3 免疫小鼠脾臟CD4⁺T細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        4.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測不同小鼠免疫后DC細(xì)胞TLR2和TLR4表達(dá)
        4.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測不同小鼠免疫后DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子表達(dá)
+T細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖檢測">        4.2.6 不同免疫小鼠來源的CD4⁺T細(xì)胞的培養(yǎng)及增殖檢測
+T細(xì)胞的IFN-γmRNA表達(dá)檢測">        4.2.7 不同免疫小鼠來源的CD4⁺T細(xì)胞的IFN-γmRNA表達(dá)檢測
        4.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 MBP聯(lián)合BCG免疫對野生小鼠DC細(xì)胞表面TLR2表達(dá)的影響
        4.3.2 MBP聯(lián)合BCG免疫對野生小鼠DC細(xì)胞表面TLR4表達(dá)的影響
        4.3.3 MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠DC細(xì)胞共刺激分子表達(dá)的影響
        4.3.4 TLR2對MBP聯(lián)合BCG在體內(nèi)促進(jìn)DC細(xì)胞CD80、CD86和MHC-II分子的表達(dá)的影響
        4.3.5 TLR4對MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠DC細(xì)胞共刺激分子表達(dá)的影響
+T淋巴細(xì)胞增殖的影響">        4.3.6 TLR2/TLR4對MBP聯(lián)合BCG體內(nèi)免疫小鼠后CD4⁺T淋巴細(xì)胞增殖的影響
+T細(xì)胞IFN-γ基因表達(dá)的影響">        4.3.7 MBP聯(lián)合BCG免疫對CD4⁺T細(xì)胞IFN-γ基因表達(dá)的影響
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
第5章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組人MUC1-MBP融合蛋白誘導(dǎo)小鼠Th1活化[J]. 張淑芳,臺桂香,馬吉春,高航.  免疫學(xué)雜志. 2007(04)
[2]重組人MUC1-MBP融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及其免疫活性測定[J]. 臺桂香,張吉鳳,朱迅.  中國免疫學(xué)雜志. 2003(11)



本文編號：3044934