目的構(gòu)建Flp/FRT位點(diǎn)特異重組系統(tǒng)介導(dǎo)的致死型約氏瘧原蟲基因條件修飾體系,用于瘧原蟲紅前期基因功能的研究。方法構(gòu)建含有Flp酶基因序列和FRT標(biāo)記耐藥基因的重組質(zhì)粒,通過Nucleofector電轉(zhuǎn)技術(shù)將線性化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至約氏瘧原蟲P.yoelii 17XL。經(jīng)藥物篩選并克隆后,利用PCR和核酸探針雜交進(jìn)行基因型鑒定。經(jīng)蚊體內(nèi)發(fā)育,啟動(dòng)Flp酶介導(dǎo)的位點(diǎn)特異重組去除藥物篩選基因（hDHFR）,并利用PCR技術(shù)分析基因工程瘧原蟲內(nèi)Flp酶介導(dǎo)的FRT位點(diǎn)間的重組效率。通過檢測(cè)感染小鼠的發(fā)病情況、瘧疾血癥及生存曲線分析基因工程瘧原蟲的生物學(xué)特性。結(jié)果成功構(gòu)建打靶載體pyUIS4/Flp并重組至UIS4基因的5′調(diào)控區(qū),獲同源重組瘧原蟲P.yUIS4/Flp（R）,經(jīng)蚊體內(nèi)發(fā)育獲位點(diǎn)特異重組刪除藥物篩選基因的基因工程瘧原蟲P.yUIS4/Flp。PCR和核酸探針鑒定基因工程瘧原蟲基因型正確�；蚬こ摊懺x內(nèi)Flp酶介導(dǎo)的FRT位點(diǎn)間的重組在發(fā)育至14d的子孢子內(nèi)達(dá)到近100%的重組效率。與野生型瘧原蟲比較,小鼠感染后3 d鏡下均查見感染紅細(xì)胞,其內(nèi)瘧原蟲形態(tài)未見異常,7 d紅細(xì)胞寄生率達(dá)峰... 

【文章來源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2020,15(06)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 瘧原蟲蟲株、蚊蟲及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 打靶載體的構(gòu)建
        2.2 基因工程瘧原蟲的構(gòu)建
        2.3 基因工程瘧原蟲的生物特性分析
        2.4 基因工程瘧原蟲的Flp酶介導(dǎo)的位點(diǎn)特異重組（SSR）效率分析
結(jié) 果
    1 打靶載體pyUIS4/flp的構(gòu)建及鑒定
    2 基因工程瘧原蟲P.yUIS4/Flp的構(gòu)建及鑒定
    3 基因工程瘧原蟲P.yUIS4/Flp的表型分析
    4 基因工程瘧原蟲P.yUIS4/flp的位點(diǎn)特異重組（SSR）效率分析
討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]位點(diǎn)特異性重組技術(shù)及其在寄生蟲學(xué)研究中的應(yīng)用[J]. 梁佳元,羅恩杰.  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2011(04)



本文編號(hào)：3044194