發(fā)布時間：2017-04-13 17:20

  本文關(guān)鍵詞：新基因MXRA7的組織學(xué)表達(dá)及功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的基質(zhì)重建相關(guān)分子7(MXRA7),是經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測存在的基因,已有越來越多的生物信息學(xué)資料如高通量數(shù)據(jù)證實(shí)該基因的存在,但目前對其生物學(xué)功能還知之甚少。本課題組應(yīng)用全基因組表達(dá)芯片技術(shù),在研究小鼠角膜炎性損傷后新生血管的病理過程中差異表達(dá)基因時,捕捉到了MXRA7基因的變化。本研究擬在生物信息學(xué)預(yù)測分析和前期實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上,探究MXRA7基因在小鼠不同組織的表達(dá)分布及生物學(xué)功能。方法運(yùn)用現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫資源,用生物信息學(xué)方法分析MXRA7基因在小鼠不同組織的表達(dá)與生物學(xué)功能。引進(jìn)構(gòu)建MXRA7基因缺陷小鼠,研究正常野生型小鼠與缺陷小鼠之間的生理學(xué)差異。應(yīng)用熒光實(shí)時定量PCR技術(shù)(RT-q PCR)檢測MXRA7基因在不同組織中m RNA的表達(dá)水平。根據(jù)基因的組織表達(dá)分布及可能的預(yù)測功能,在MXRA7基因野生型與缺陷型小鼠建立不同的疾病模型:耳洞損傷修復(fù)模型,Matrigel新生血管模型及主動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外誘導(dǎo)成毛細(xì)血管網(wǎng)腔模型。結(jié)果成功繁育可穩(wěn)定遺傳的MXRA7基因缺陷小鼠。RT-q PCR檢測顯示該基因m RNA在小鼠各主要組織或器官中廣泛表達(dá),表達(dá)水平最高的依次為眼睛、肺、腦,表達(dá)最低是骨髓。耳洞損傷修復(fù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MXRA7基因缺陷鼠耳洞愈合程度明顯低于野生型鼠,且在耳洞損傷后第13、26、32天的耳洞面積有差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05);損傷愈合組織經(jīng)HE染色后統(tǒng)計(jì)分析,兩組小鼠的組織橫截面積相近或無明顯差異;Masson染色分析,缺陷型小鼠耳洞愈合組織結(jié)締組織較野生型致密,愈合組織血管分析顯示野生型小鼠微血管密度高于缺陷型。Matrigel膠體內(nèi)成毛細(xì)血管實(shí)驗(yàn)顯示,野生型組小鼠Matrigel膠體內(nèi)血管密度、紅細(xì)胞數(shù)量明顯高于缺陷鼠組。主動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外誘導(dǎo)成毛細(xì)血管網(wǎng)腔實(shí)驗(yàn)證明,MXRA7野生型小鼠內(nèi)皮細(xì)胞成管能力優(yōu)于缺陷型。結(jié)論實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)MXRA7基因在機(jī)體廣泛表達(dá),MXRA7基因在損傷修復(fù)等胞外基質(zhì)重建系統(tǒng)中發(fā)揮一定的功能,可能是通過影響胞外基質(zhì)的代謝,成纖維細(xì)胞的遷移和新生血管的生成發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：MXRA7 生物信息學(xué) 基因缺陷鼠 損傷修復(fù) 新生血管
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-8
• 引言8-10
• 第一章 材料與方法10-18
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料10-12
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物10
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器10-11
• 1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)材料與試劑11-12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法12-18
• 1.2.1 MXRA7基因缺陷鼠鑒定與繁育12-13
• 1.2.1.1 DNA取材12
• 1.2.1.2 PCR及瓊脂糖凝膠電泳鑒定12-13
• 1.2.2 RT-qPCR MXRA7基因mRNA在組織器官水平表達(dá)分布13-14
• 1.2.2.1 組織或器官RNA提取13-14
• 1.2.2.2 RNA反轉(zhuǎn)錄與實(shí)時熒光定量反應(yīng)14
• 1.2.3 耳洞損傷修復(fù)模型建立及處理14-16
• 1.2.3.1 耳洞打孔14-15
• 1.2.3.2 耳洞組織固定及HE染色15
• 1.2.3.3 Masson三色染色15-16
• 1.2.4 Matrigel體內(nèi)新生血管模型16
• 1.2.4.1 模型建立16
• 1.2.4.2 膠體取材拍照16
• 1.2.5 主動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外成毛細(xì)血管網(wǎng)模型16
• 1.2.5.1 主動脈內(nèi)皮細(xì)胞原代分離培養(yǎng)16
• 1.2.5.2 內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)成毛細(xì)血管網(wǎng)16
• 1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析16-18
• 第二章 結(jié)果18-28
• 2.1 構(gòu)建MXRA7基因缺陷小鼠基因型鑒定結(jié)果18
• 2.2 RT-qPCR檢測各組織器官中MXRA7 mRNA的表達(dá)18-19
• 2.3 耳洞損傷模型19-24
• 2.4 Matrigel體內(nèi)成管實(shí)驗(yàn)結(jié)果24-25
• 2.5 主動脈內(nèi)皮細(xì)胞體外誘導(dǎo)成毛細(xì)血管網(wǎng)腔實(shí)驗(yàn)25-28
• 討論28-31
• 結(jié)論31-32
• References32-34
• 綜述34-46
• 參考文獻(xiàn)44-46
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果46-47
• 致謝47-48

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本文編號：304099