目的:探討低溫瓊脂包埋振動(dòng)切片機(jī)切片法制作的大鼠視網(wǎng)膜切片內(nèi)核層神經(jīng)元的形態(tài)和基本電生理學(xué)特性。方法:采用低溫瓊脂包埋振動(dòng)切片機(jī)切片的方法制作大鼠視網(wǎng)膜切片,對(duì)內(nèi)核層的神經(jīng)元進(jìn)行膜片鉗全細(xì)胞記錄,同時(shí)在胞內(nèi)液中加入熒光黃觀察記錄細(xì)胞的形態(tài)。結(jié)果:該方法制作的視網(wǎng)膜切片切面平整、細(xì)胞活性好、保留了細(xì)胞之間的突起聯(lián)系,能夠根據(jù)細(xì)胞胞體的大小、位置初步辨別細(xì)胞的種類。在視網(wǎng)膜切片上熒光黃顯示的細(xì)胞形態(tài)表明,雙極細(xì)胞胞體呈梭形,突起主要沿縱向延伸;而水平細(xì)胞和無長(zhǎng)突細(xì)胞胞體圓形或橢圓形、胞體較大,分別位于內(nèi)核層的最外層和最內(nèi)層。水平細(xì)胞和無長(zhǎng)突細(xì)胞的靜息膜電位（RMP）和膜電容（Cm）明顯高于雙極細(xì)胞。給予時(shí)程40ms,步階10mV從-60mV至+40mV的電壓刺激,41.7%的視錐雙極細(xì)胞和64.7%的無長(zhǎng)突細(xì)胞表現(xiàn)出內(nèi)向鈉電流和外向鉀電流,其他細(xì)胞則只表現(xiàn)出外向鉀電流。結(jié)論:采用低溫瓊脂包埋振動(dòng)切片機(jī)切片的方法操作簡(jiǎn)單,制作的切片質(zhì)量穩(wěn)定可靠,使得在視網(wǎng)膜切片上對(duì)包括水平細(xì)胞在內(nèi)的不同內(nèi)核層神經(jīng)元進(jìn)行膜片鉗記錄成為可能。進(jìn)一步研究視網(wǎng)膜內(nèi)核層神經(jīng)元的電生理學(xué)特性,有助于揭示視覺信號(hào)的發(fā)生、... 

【文章來源】：國(guó)際眼科雜志. 2020,20(05)北大核心

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視網(wǎng)膜切片的形態(tài)以及切片上細(xì)胞之間的突起聯(lián)系

圖1 視網(wǎng)膜切片的形態(tài)以及切片上細(xì)胞之間的突起聯(lián)系表1 內(nèi)核層神經(jīng)元的被動(dòng)膜學(xué)特性 x ˉ ±s 指標(biāo) 水平細(xì)胞組(n=7) 視桿雙極細(xì)胞組(n=15) 視錐雙極細(xì)胞組(n=12) 無長(zhǎng)突細(xì)胞組(n=17) F P RMP(mV) -51.2±4.25a -47.3±2.76 -42.3±5.53 -59.8±3.15c 2.814 0.032 IR(MΩ) 296±17.8 317±40.3 303±24.5 341±24.1 7.98 0.762 Cm(pF) 35.6±4.79a 28.5±6.12 25.7±3.26 39.3±1.37c 3.54 0.042 注:RMP:靜息膜電位; IR:膜輸入阻抗; Cm:膜電容。aP<0.05 vs 視桿雙極細(xì)胞; cP<0.05 vs 視錐雙極細(xì)胞。

Euler等[7]根據(jù)胞體的位置、軸突形態(tài)以及軸突終末的位置將大鼠視網(wǎng)膜雙極細(xì)胞分為10種類型,包括1種視桿雙極細(xì)胞和9種視錐雙極細(xì)胞。Golgi鍍銀染色和免疫組化染色[8-9]表明視桿雙極細(xì)胞胞體大多位于內(nèi)核層靠近外叢狀層的部位,軸突較長(zhǎng), 深達(dá)內(nèi)叢狀層的最內(nèi)層,末端呈瘤樣膨大。內(nèi)叢狀層平均分為五等分,靠近內(nèi)核層的兩等分被稱作a亞層,靠近節(jié)細(xì)胞層的三等分被稱為b亞層,分別對(duì)應(yīng)為ON和OFF亞層,視桿雙極細(xì)胞的軸突末梢終止于b亞層[10]。在大多哺乳動(dòng)物的視網(wǎng)膜中[11-12],根據(jù)軸突末梢的分支模式和終止的部位劃分存在9種視錐雙極細(xì)胞。 其中軸突末梢終止于內(nèi)從狀層b亞層的屬于ON型視錐雙極細(xì)胞,終止于a亞層的屬于OFF型視錐雙極細(xì)胞。在膜片鉗記錄的胞內(nèi)液中加入0.02%熒光黃,記錄完畢后觀察細(xì)胞形態(tài),由于雙極細(xì)胞的軸突主要沿縱向延伸,在視網(wǎng)膜切片上可根據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步鑒定記錄細(xì)胞所屬的亞型。在活性較好的視網(wǎng)膜切片上,雙極細(xì)胞胞體大多成梭形,視桿雙極細(xì)胞較視錐雙極細(xì)胞略大,更靠近外叢狀層,有時(shí)可見較長(zhǎng)的軸突深入內(nèi)從狀層。大多數(shù)脊椎動(dòng)物視網(wǎng)膜包含兩種基本類型的水平細(xì)胞,一種是沒有軸突的A型水平細(xì)胞,含有相對(duì)大而分支少的初級(jí)樹突,另一種是有軸突的B型水平細(xì)胞,有較多的樹突。在形態(tài)和活性較好的視網(wǎng)膜切片上,根據(jù)水平細(xì)胞位于INL最外層的特點(diǎn),不難找到水平細(xì)胞,但是由于該類細(xì)胞的突起只在OPL內(nèi)橫向延伸,故難以在切片上進(jìn)一步區(qū)分A型和B型水平細(xì)胞。無長(zhǎng)突細(xì)胞的分型更為復(fù)雜[13-14],在視網(wǎng)膜切片上難以確切區(qū)分其亞型,必須結(jié)合免疫組化染色和鋪片中的形態(tài)來進(jìn)一步區(qū)分。在本實(shí)驗(yàn)活性較好的視網(wǎng)膜切片上,水平細(xì)胞和無長(zhǎng)突細(xì)胞胞體較大,呈圓形或橢圓形,前者位于INL的最外層,后者位于INL的最內(nèi)層。在實(shí)驗(yàn)中對(duì)INL-無長(zhǎng)突細(xì)胞記錄完畢觀察形態(tài)時(shí),發(fā)現(xiàn)節(jié)細(xì)胞層有一細(xì)胞著色,且可見二者之間的突起聯(lián)系,這更進(jìn)一步說明該切片方法在較大程度上保留了細(xì)胞之間的突起聯(lián)系,更接近生理狀態(tài)。與腦片不同,由于視網(wǎng)膜組織疏松,有些細(xì)胞胞體較小,全細(xì)胞記錄完畢后移走電極通常會(huì)把細(xì)胞帶走,電極保持原位稍影響細(xì)胞形態(tài)的觀察。


本文編號(hào)：3038841