目的檢測5株1/2a血清型單增李斯特菌生物膜形成能力并分析其單增李斯特菌生物膜形成相關(guān)基因的攜帶情況,為進一步探究單增李斯特菌生物膜形成影響因素及致病機制提供線索。方法依據(jù)96孔微孔板結(jié)晶紫染色方法對5株單增李斯特菌進行了生物膜形成能力檢測,并用掃描電鏡觀察生物膜形成情況。使用聚合酶鏈反應（PCR）技術(shù)對5株菌進行了生物膜形成相關(guān)的12對基因（sigB,prfA,yneA,hpt,relA,flaA,recA,agrA,luxS,degU,motB,bapL）全長的擴增及測序分析,通過與GeneBank中已公布的單增標準菌株EGD-e序列比對確定基因變異情況。結(jié)果 5株1/2a血清型單增李斯特菌形成生物膜的能力有所不同,結(jié)晶紫染色觀察結(jié)果與掃描電鏡觀察結(jié)果較為一致。11種生物膜相關(guān)基因在5株單增李斯特菌中的檢測結(jié)果全陽性,測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分基因出現(xiàn)突變位點（多為同義突變,部分為非同義突變）。bapL基因在生物膜形成能力較低兩株菌中為陽性,而在生物膜形成能力較高的兩株菌中為陰性。結(jié)論不同的1/2a血清型單增李斯特菌間生物膜形成能力有所差異,5株1/2a血清型單增李斯特菌bapL基因攜帶與其... 

【文章來源】：中國人獸共患病學報. 2013,29(04)北大核心

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【部分圖文】：

圖１結(jié)晶紫染色法測定５株１／２ａ型單增李斯特菌生物膜形成量

檢測結(jié)果為陽性，而生物膜形成能力較高菌株ＬＭ０８０、ＬＭ１５１的ｂａｐＬ基因檢測為陰性。２．１．３４株１／２ａ血清型國內(nèi)菌株的１１對基因序列比對分析對國內(nèi)４株單增李斯特菌的１１種生物膜相關(guān)基因進行測序分析，并與ＧｅｎＢａｎｋ中公布的單增李斯特菌參考菌株ＥＧＤ－ｅ的相關(guān)基因序列進行比對，發(fā)現(xiàn)在許多基因的多個位點出現(xiàn)了突變，其中大部分均為同義突變，所編碼的氨基酸序列未發(fā)生變化；同時在多株菌基因中也出現(xiàn)一些非同義突變的位點變化，結(jié)果見表３。圖２ｂａｐＬ基因４對引物在５株菌中的ＰＣＲ擴增結(jié)果Ｆｉｇ．２ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆ４ｐａｉｒｓｏｆｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｏｆｂａｐＬｇｅｎｅＲｅｓｕｌｔｓｏｆＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙ４ｐａｉｒｓｏｆｓｐｅ－ｃｉｆｉｃｐｒｉｍｅｒｓｏｆｂａｐＬｇｅｎｅｏｆ５ｓｅｒｏｔｙｐｅ１／２ａｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｈｏｗｎａｂｏｖｅ；１－５ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｔｈｅｓｔｒａｉｎＬＭ１３６，ＬＭ１４１，ＥＧＤ－ｅ，ＬＭ８０，ａｎｄＬＭ１５１；ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｓｏｆｆｏｕｒｔａｒｇｅｔｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｂａｐＬ１（４０３ｂｐ），ｂａ－ｐＬ２（４８８ｂｐ），ｂａｐＬ３（７９１ｂｐ），ｂａｐＬ４（６３３ｂｐ）．２．３生物膜培養(yǎng)樣品ＳＥＭ觀察結(jié)果利用掃描電鏡在１００００倍和１５０００倍視野條件下觀察５株菌４０ｈ生物膜形成情況，生物膜形成能力高低與結(jié)晶紫染色結(jié)果一致，如圖３所示。３討論目前對單增李斯特菌生物膜形成的分子


本文編號：3031735