目的 :建立并評(píng)價(jià)彈性蛋白酶誘導(dǎo)小鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD合并骨質(zhì)疏松癥模型。方法:24只健康雌性8周齡C57BL/6小鼠（重約18 g）隨機(jī)分為3組,對(duì)照組予以氣管內(nèi)滴注生理鹽水,實(shí)驗(yàn)1組和實(shí)驗(yàn)2組氣管內(nèi)滴注彈性蛋白酶,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)1組繼續(xù)飼養(yǎng)8周后處死,實(shí)驗(yàn)2組繼續(xù)飼養(yǎng)12周后處死。HE染色評(píng)估對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠肺組織與脛骨組織病理學(xué)改變。ELISA檢測(cè)支氣管肺泡灌洗液與血清相關(guān)炎癥因子含量。Micro-CT檢測(cè)小鼠股骨骨量相關(guān)參數(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)破骨與成骨相關(guān)基因表達(dá)情況。結(jié)果:肺組織病理顯示實(shí)驗(yàn)組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡壁變薄或斷裂,肺泡腔擴(kuò)大。肺泡灌洗液炎癥因子IL-6與TNF-α較對(duì)照組明顯升高（P<0.001）,血清炎癥因子IL-1β與TNF-α較對(duì)照組明顯上升（P<0.001）。實(shí)驗(yàn)組BV/TV（骨體積分?jǐn)?shù)）、Tb.Th（平均骨小梁厚度）與Tb.N（平均骨小梁數(shù)）較對(duì)照組均明顯降低（P<0.05）,實(shí)驗(yàn)組Tb.Sp（平均骨小梁分離度）和BS/BV（骨表面積分?jǐn)?shù)）較對(duì)照... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)骨傷. 2020,33(04)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

小鼠COPD誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥模型評(píng)價(jià)2a,2b,2c．氣管內(nèi)滴注生理鹽水后飼養(yǎng)8 周（2a．對(duì)照組）與滴注0.1 U彈性蛋白酶后分別飼養(yǎng)8 周（2b．實(shí)驗(yàn)1 組）和12周（2c．實(shí)驗(yàn)2組），3組脛骨組織HE染色（×100)2d,2e,2f.3組小鼠股骨遠(yuǎn)端三維CT重建（2d．對(duì)照組；2e．實(shí)驗(yàn)1 組；2f．實(shí)驗(yàn)2組）

為了進(jìn)一步了解彈性蛋白酶誘發(fā)的小鼠COPD對(duì)骨代謝的影響，使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)分析破骨相關(guān)基因與成骨相關(guān)基因mRNA的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組小鼠脛骨組織破骨相關(guān)基因NFATc1、c-Fos、CTSK與TRAP mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表4）。脛骨組織CTSK免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組CTSK表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高（P<0.05）（圖3，表4）。與之對(duì)應(yīng)，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組小鼠脛骨組織成骨相關(guān)基因COL1α、Runx2、ALP與OCN mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表5）。實(shí)驗(yàn)組破骨與成骨相關(guān)基因表達(dá)水平均呈時(shí)間依賴。以上結(jié)果在一定程度上表明，彈性蛋白酶誘發(fā)的小鼠COPD既促進(jìn)骨吸收又抑制骨形成。3 討論

小鼠脛骨近端組織病理學(xué)結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組較對(duì)照組骨量明顯降低（圖2a,2b,2c）。隨后對(duì)3組小鼠股骨行三維CT重建并對(duì)相關(guān)參數(shù)進(jìn)行分析。Micro-CT圖像顯示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組小鼠股骨骨量顯著降低，表現(xiàn)為骨小梁變細(xì)、數(shù)量較少、間隙增寬（圖2d,2e,2f）。實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組BV/TV（骨體積分?jǐn)?shù)）、Tb.Th（平均骨小梁厚度）與Tb.N（平均骨小梁數(shù)）較對(duì)照組均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），實(shí)驗(yàn)2組測(cè)量值低于實(shí)驗(yàn)1組（表3）。此外，實(shí)驗(yàn)1組與實(shí)驗(yàn)2組Tb.Sp（平均骨小梁分離度）和BS/BV（骨表面積分?jǐn)?shù)）較對(duì)照組明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且實(shí)驗(yàn)2組測(cè)量值高于實(shí)驗(yàn)1組（表3）。以上結(jié)果表明，小鼠COPD誘發(fā)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生發(fā)展，并隨時(shí)間延長(zhǎng)，嚴(yán)重程度增加。圖2 小鼠COPD誘發(fā)的骨質(zhì)疏松癥模型評(píng)價(jià)2a,2b,2c．氣管內(nèi)滴注生理鹽水后飼養(yǎng)8 周（2a．對(duì)照組）與滴注0.1 U彈性蛋白酶后分別飼養(yǎng)8 周（2b．實(shí)驗(yàn)1 組）和12周（2c．實(shí)驗(yàn)2組），3組脛骨組織HE染色（×100)2d,2e,2f.3組小鼠股骨遠(yuǎn)端三維CT重建（2d．對(duì)照組；2e．實(shí)驗(yàn)1 組；2f．實(shí)驗(yàn)2組）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨質(zhì)疏松性椎體壓縮性骨折椎體后凸成形術(shù)后隱性失血及其影響因素分析[J]. 管軍輝,鄭文標(biāo),黃皆和,王勇,楊晟,肖柏松,阮建偉.  中國(guó)骨傷. 2019(05)
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[3]磨損微粒誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與無(wú)菌性松動(dòng)的研究進(jìn)展[J]. 劉國(guó)印,趙建寧,王瑞.  中國(guó)骨傷. 2013(09)



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