本文關(guān)鍵詞：釉結(jié)在牙齒發(fā)育中作用的探究及iPS細(xì)胞向軟骨方向誘導(dǎo)分化的體外研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：牙齒的發(fā)育是一個長期、復(fù)雜的連續(xù)過程，包括牙胚的發(fā)生(initiation)、牙胚形成(morphogenesis)、細(xì)胞分化(differentiation)、牙齒萌出(eruption)等幾個階段。釉結(jié)是牙胚發(fā)育進入帽狀期和鐘狀期出現(xiàn)的暫時性的結(jié)構(gòu)，在牙發(fā)育后期消失。釉結(jié)位于牙胚中央，研究表明，釉結(jié)是調(diào)節(jié)牙早期形態(tài)發(fā)生的信號中心。因此，本實驗旨在探究釉結(jié)在牙齒發(fā)生發(fā)育過程中的重要作用，利用小鼠的牙胚上皮組織與牙胚間充質(zhì)組織重組移植的方法證實釉結(jié)在牙齒形成大小以及牙尖數(shù)量上起著至關(guān)重要的作用，隨后用原位雜交方法追蹤釉結(jié)的位置。本實驗分別將完整的牙胚上皮組織、去掉釉結(jié)部分的牙胚上皮組織釉結(jié)組織與牙胚間充質(zhì)組織重組，進行小鼠腎包膜移植體內(nèi)實驗以及體外原位雜交實驗，體內(nèi)移植實驗結(jié)果表明，缺少釉結(jié)的重組實驗組形成牙齒的大小比其他實驗組小以及牙尖數(shù)量明顯少。體外原位雜交實驗結(jié)果表明：即使去掉釉結(jié)的上皮部分，在隨后的發(fā)育過程中也會再生出新的釉結(jié)。以上實驗結(jié)果說明，釉結(jié)確實在牙齒發(fā)生發(fā)育過程中是必不可少的一個部分。 由于缺乏合適的種子細(xì)胞，在軟骨缺損的臨床治療方面，尚未建立完全有效的技術(shù)方法。因此，，軟骨組織工程開發(fā)新的種子細(xì)胞來源有著重要的科學(xué)意義。干細(xì)胞技術(shù)是當(dāng)今再生醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域最為前沿的科學(xué)，本課題以誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞為種子來源，通過擬胚體途徑，在體外誘導(dǎo)軟骨形成。我們將體外誘導(dǎo)分化的組織塊進行軟骨的表征實驗，通過QPCR、免疫蛋白印跡、體外免疫染色等實驗方法證實我們誘導(dǎo)的組織塊具備軟骨的表征。最終結(jié)果表明該途徑可以成功誘導(dǎo)出具有軟骨特征的組織樣品，從而初步解決了軟骨研究的種子細(xì)胞問題，也進一步為軟骨發(fā)生發(fā)育的研究以及軟骨疾病的修復(fù)提供了一定的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：牙的發(fā)育 釉結(jié) 軟骨 干細(xì)胞 分化
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R333.1
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 第一章 緒論8-18
• 1.1 牙齒的發(fā)生發(fā)育及釉結(jié)的發(fā)生發(fā)育8-12
• 1.1.1 牙齒的發(fā)生發(fā)育8-9
• 1.1.2 釉結(jié)的發(fā)生發(fā)育9-10
• 1.1.3 釉結(jié)與牙齒發(fā)生發(fā)育現(xiàn)狀研究10-12
• 1.2 多能干細(xì)胞的相關(guān)研究與應(yīng)用12-13
• 1.3 多能干細(xì)胞向軟骨方向分化13-16
• 1.3.1 軟骨的發(fā)生發(fā)育13-14
• 1.3.2 軟骨損傷退變及相關(guān)疾病的現(xiàn)狀研究及治療研究14-15
• 1.3.3 多能干細(xì)胞體外向軟骨分化的相關(guān)研究15-16
• 1.4 目的與意義16
• 1.5 研究思路16-18
• 1.5.1 釉結(jié)在牙齒發(fā)生發(fā)育中的重要作用16-17
• 1.5.2 多能干細(xì)胞體外向軟骨分化的相關(guān)研究17-18
• 第二章 釉結(jié)在牙齒發(fā)生發(fā)育中重要作用的探究18-30
• 2.1 實驗動物與實驗耗材18-19
• 2.1.1 實驗動物18
• 2.1.2 實驗器材18
• 2.1.3 實驗試劑18-19
• 2.2 實驗方法19-24
• 2.2.1 14.5 天牙胚的獲取19
• 2.2.2 牙胚上皮與間充質(zhì)的分離19-20
• 2.2.3 上皮組織與間充質(zhì)組織的重組與體外培養(yǎng)20
• 2.2.4 腎包膜移植、移植后取樣20-21
• 2.2.5 冰凍組織切片21
• 2.2.6 組織切片蘇木素-伊紅（HE）染色及顯微鏡下觀察21
• 2.2.7 處理培養(yǎng)牙胚以及處理后牙胚的腎包膜移植21-22
• 2.2.8 組織原位雜交22-24
• 2.3 實驗結(jié)果與討論24-29
• 2.3.1 牙胚的分離形態(tài)觀察及釉結(jié)的識別切割24-25
• 2.3.2 重組牙胚的移植結(jié)果25-26
• 2.3.3 重組后牙齒的染色形態(tài)觀察26-27
• 2.3.4 體外培養(yǎng)不同組重組牙胚的釉結(jié)-FGF4 原位雜交定位27-29
• 2.4 小結(jié)29-30
• 第三章 誘導(dǎo)多能干細(xì)胞向軟骨方向分化的體外研究30-46
• 3.1 實驗耗材30-31
• 3.1.1 實驗器材30
• 3.1.2 實驗試劑30-31
• 3.2 實驗方法31-39
• 3.2.1 細(xì)胞的準(zhǔn)備31-32
• 3.2.2 擬胚體（embryonic body, EB）的制備32
• 3.2.3 向軟骨方向誘導(dǎo)分化32-33
• 3.2.4 分化過程中樣品的收集33
• 3.2.5 RNA 的提取33-34
• 3.2.6 RNA 反轉(zhuǎn)錄34
• 3.2.7 qRT-PCR 檢測34-35
• 3.2.8 形態(tài)觀察35
• 3.2.9 冰凍切片35
• 3.2.10 組織切片蘇木素-伊紅（HE）染色及顯微鏡下觀察35
• 3.2.11 阿利新藍(lán)染色（Alcian blue staining,AB）35
• 3.2.12 免疫組織化學(xué)染色35-36
• 3.2.13 免疫印跡實驗（Western blot）36-39
• 3.3 實驗結(jié)果與討論39-45
• 3.3.1 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導(dǎo)分化過程中形態(tài)的變化39-40
• 3.3.2 iPSCs/ESCs 向軟骨方向分化的形態(tài)觀察40
• 3.3.3 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導(dǎo)分化前期中胚層基因表達情況40-41
• 3.3.4 iPSCs/ESCs 向軟骨方向誘導(dǎo)分化不同時期軟骨相關(guān)基因表達情況41-42
• 3.3.5 iPSCs/ESCs 誘導(dǎo)成軟骨的胞外基質(zhì)表達情況42-44
• 3.3.6 iPSCs/ESCs 誘導(dǎo)成軟骨的胞外蛋白分泌情況44-45
• 3.4 小結(jié)45-46
• 參考文獻46-49
• 作者簡介49
• 已發(fā)表論文49-50
• 致謝50

【共引文獻】

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本文編號：300624