發(fā)布時(shí)間：2017-04-12 03:08

  本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體3活化對(duì)小鼠脂肪干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells, ASCs)能夠自發(fā)遷移至組織損傷或炎癥部位,通過(guò)細(xì)胞因子對(duì)免疫細(xì)胞的調(diào)控,發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用；而且與研究最廣泛的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相比,ASCs具備來(lái)源豐富、提取方便等優(yōu)勢(shì)。因此,ASCs已經(jīng)成為組織損傷修復(fù)、自身免疫性疾病等疾病治療的研究熱點(diǎn)。而如何進(jìn)一步提升ASCs的遷移能力、免疫調(diào)節(jié)能力和其抗炎能力,是干細(xì)胞治療領(lǐng)域的一個(gè)重要研究方向。通過(guò)聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly(I:C))對(duì)ASCs Toll樣受體3(TLR3)的激活,本論文構(gòu)建了一種全新的脂肪干細(xì)胞表型(定義為ASC2)。本論文通過(guò)研究ASC2集落形成單位、成骨成脂分化能力、細(xì)胞表面抗原標(biāo)志的表達(dá)、免疫調(diào)節(jié)因子的表達(dá)以及遷移能力等,檢測(cè)TLR3的活化對(duì)ASCs生物學(xué)功能的影響。本論文首先利用酶消化法,從健康小鼠供體的腹部脂肪組織中提取ASCs,通過(guò)體外培養(yǎng)擴(kuò)增、誘導(dǎo)分化、集落形成及細(xì)胞表面抗原標(biāo)志的分析,確定分離出的細(xì)胞為ASCs。然后,將TLR3激活劑Poly(I:C)加入ASCs培養(yǎng)液中,誘導(dǎo)出ASC2。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)試、Real-time PCR、染色鑒定等多種檢測(cè)方法,將ASCs和ASC2在表面抗原標(biāo)志表達(dá)、細(xì)胞因子的分泌、集落形成單位、成骨成脂分化及遷移能力等方面進(jìn)行了對(duì)比。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ASCs與ASC2茜素紅、油紅O染色結(jié)果均呈陽(yáng)性,染色結(jié)果沒(méi)有明顯差距；流式分析結(jié)果顯示ASCs和ASC2均陽(yáng)性表達(dá)Scal和CD106,陰性表達(dá)CD11b、CD45、CD34和CD31; ASCs和ASC2集落形成單位測(cè)試沒(méi)有顯著性差異,說(shuō)明TLR3的活化對(duì)ASCs的成骨成脂分化能力、細(xì)胞表面標(biāo)志表達(dá)及體外增殖能力沒(méi)有造成顯著性影響。但是,Real-time PCR的結(jié)果表明TLR3的活化增強(qiáng)了IL-6、TGF-β、RANTES和VEGF的表達(dá),抑制了KC、MCP-1和Eotaxin-1的表達(dá)；趨化性實(shí)驗(yàn)則證實(shí)了TLR3的活化增強(qiáng)了ASCs的遷移能力。本論文證實(shí)了TLR3的活化并沒(méi)有改變ASCs的干細(xì)胞特性,ASC2仍然保持了體外自我更新增殖、分化潛能以及表達(dá)特定抗原標(biāo)志的特性。但是,TLR3的活化改變了ASCs細(xì)胞因子的表達(dá)和遷移能力,從而改變了其免疫調(diào)節(jié)作用,提高了其抗炎能力,使得ASC2更好的應(yīng)用到自身免疫性疾病,比如1型糖尿病等治療中。
【關(guān)鍵詞】：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 TLR3 抗炎 免疫調(diào)節(jié) 增殖 分化
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 文獻(xiàn)綜述11-23
• 1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞11-17
• 1.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞的定義及研究意義11-12
• 1.1.2 間充質(zhì)干細(xì)胞的多向分化潛能12-13
• 1.1.3 間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫學(xué)特性13-15
• 1.1.4 間充質(zhì)干細(xì)胞的遷移和歸巢能力15
• 1.1.5 間充質(zhì)干細(xì)胞在自身免疫等疾病中的應(yīng)用15-17
• 1.1.6 間充質(zhì)干細(xì)胞應(yīng)用中存在的問(wèn)題17
• 1.2 Toll樣受體17-21
• 1.2.1 Toll樣受體生物學(xué)性能18
• 1.2.2 Toll樣受體信號(hào)通路18-19
• 1.2.3 Toll樣受體免疫學(xué)意義19-21
• 1.3 論文選題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容21-23
• 2 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定23-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法23-30
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑23-24
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)所需試劑配制24-26
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備26-27
• 2.1.5 ASCs的分離與原代培養(yǎng)27-28
• 2.1.6 ASCs的傳代培養(yǎng)28
• 2.1.7 ASCs的凍存與復(fù)蘇28
• 2.1.8 ASCs集落形成單位鑒定28-29
• 2.1.9 流式細(xì)胞儀測(cè)試ASCs表面標(biāo)志的表達(dá)29
• 2.1.10 ASCs成骨分化及鑒定29
• 2.1.11 ASCs成脂分化及鑒定29-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析30-34
• 2.2.1 ASCs集落形成單位鑒定結(jié)果30-31
• 2.2.2 流式細(xì)胞儀測(cè)試結(jié)果31-32
• 2.2.3 ASCs成骨分化染色結(jié)果32-33
• 2.2.4 ASCs成脂分化染色結(jié)果33-34
• 2.3 本章小結(jié)34-36
• 3 POLY(I：C)對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的刺激36-44
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法36-37
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑36
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑配制36
• 3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備36
• 3.1.4 POLY(I：C)對(duì)ASCs的刺激36
• 3.1.5 流式細(xì)胞儀測(cè)試ASCs與ASC2表面標(biāo)志的表達(dá)36-37
• 3.1.6 集落形成單位檢測(cè)ASCs與ASC2增殖能力37
• 3.1.7 ASCs與ASC2成骨分化及鑒定37
• 3.1.8 ASCs與ASC2成脂分化及鑒定37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論37-41
• 3.2.1 流式細(xì)胞儀測(cè)試結(jié)果37-39
• 3.2.2 集落形成單位檢測(cè)結(jié)果39-40
• 3.2.3 POLY(I：C)對(duì)ASCs成骨分化的影響40-41
• 3.2.4 POLY(I：C)對(duì)ASCs成脂分化的影響41
• 3.3 本章小結(jié)41-44
• 4 TLR3活化對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞免疫學(xué)性能影響44-53
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法44-45
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑44
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑配制44
• 4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備44
• 4.1.4 Real-time PCR檢測(cè)ASCs與ASC2分泌細(xì)胞因子的能力44-45
• 4.1.5 ASCs與ASC2體外趨化性實(shí)驗(yàn)45
• 4.1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析45-51
• 4.2.1 Real-time PCR檢測(cè)POLY(I：C)對(duì)ASCs分泌細(xì)胞因子的影響46-50
• 4.2.2 體外趨化性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)POLY(I：C)對(duì)ASCs遷移能力的影響50-51
• 4.3 本章小結(jié)51-53
• 結(jié)論與展望53-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 中英文縮略詞表61-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況62-63
• 致謝63-64

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Matthew W Klinker;Cheng-Hong Wei;;Mesenchymal stem cells in the treatment of inflammatory and autoimmune diseases in experimental animal models[J];World Journal of Stem Cells;2015年03期

  本文關(guān)鍵詞：Toll樣受體3活化對(duì)小鼠脂肪干細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：300579