本文關(guān)鍵詞：CQ復(fù)方對(duì)癌侵襲鏡像痛模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的及依據(jù)癌癥已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類健康、導(dǎo)致現(xiàn)代人類死亡的第一大惡疾和頑癥。癌痛是癌癥患者最常見的臨床癥狀之一,可以出現(xiàn)在癌癥的任何階段。其中癌侵襲痛(Cancer Invasion Pain, CIP)是由于腫瘤浸潤引起的疼痛,在癌癥患者上頻發(fā),是難治性癌痛之一。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CIP動(dòng)物模型出現(xiàn)鏡像痛(Mirror Image Pain, MIP),即在軀體損傷部位的對(duì)側(cè)對(duì)稱部位(鏡像部位)亦出現(xiàn)疼痛和痛敏的病癥。據(jù)研究報(bào)道,神經(jīng)病理性疼痛、炎性疼痛、皮膚組織損傷性疼痛等多種動(dòng)物模型均可以觀察到雙側(cè)痛敏的現(xiàn)象,大鼠脛骨轉(zhuǎn)移性癌痛模型也出現(xiàn)MIP現(xiàn)象。臨床上,一些嚴(yán)重的慢性疼痛、復(fù)雜區(qū)域疼痛綜合征、截肢及中風(fēng)后遺癥患者亦均可出現(xiàn)MIP,其中,癌痛患者出現(xiàn)的MIP既嚴(yán)重影響了患者的生存質(zhì)量又干擾了癌癥的治療,是臨床醫(yī)生面臨的棘手問題。我課題組根據(jù)中醫(yī)理論創(chuàng)立了具有活血行氣,祛風(fēng)除濕,通絡(luò)止痛作用的CQ復(fù)方,其主要成分是川芎嗪和青藤堿,前期的研究工作表明：CQ復(fù)方中的有效成分對(duì)多種神經(jīng)源性疼痛及骨癌痛動(dòng)物模型的鎮(zhèn)痛強(qiáng)度類似于臨床常用的非嗎啡類鎮(zhèn)痛西藥加巴噴丁,機(jī)制研究顯示,其鎮(zhèn)痛效果與抑制紋狀體細(xì)胞外液NE、Glu等神經(jīng)遞質(zhì)的水平有關(guān)。但CQ復(fù)方對(duì)CIP及繼發(fā)性的MIP作用如何,尚不明確。本實(shí)驗(yàn)采用S180肉瘤細(xì)胞構(gòu)建小鼠癌侵襲鏡像痛(Cancer Invasion Induced Mirror Image Pain, CIIMIP)模型,觀察CQ復(fù)方對(duì)其的鎮(zhèn)痛作用,檢測脊髓內(nèi)與疼痛發(fā)生和維持密切相關(guān)的興奮性氨基酸(Excitatory amino acids, EAA)和抑制性氨基酸(Inhibitory amino acids, IAA)的水平、大腦皮質(zhì)內(nèi)內(nèi)源性致痛和鎮(zhèn)痛物質(zhì)的含量及脊髓和血清內(nèi)促炎性細(xì)胞因子含量,探討上述物質(zhì)在CIIMIP發(fā)生和維持及CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制,進(jìn)一步觀察NMDA及GABAa受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響,探討CQ復(fù)方通過EAA/IAA發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的機(jī)制,為CIIMIP的機(jī)制研究和臨床治療提供參考。研究方法1小鼠CIIMIP模型的建立BALB/c雄性小鼠,連續(xù)3d進(jìn)行預(yù)刺激,第4d將雙側(cè)后足機(jī)械縮足閾值(MWT, Mechanical withdrawal threshold)≥0.4g的小鼠隨機(jī)分為正常組(Native)、操作對(duì)照組(Sham)及手術(shù)組(Surgery)。Surgery組于右腿股骨大轉(zhuǎn)子處注射0.2mLS 180細(xì)胞液(活細(xì)胞濃度為1×107/mL),Sham組于相同部位注射等量的滅活的細(xì)胞液,Native組不作任何操作。于術(shù)前及術(shù)后第2-7d測評(píng)小鼠瘤株接種側(cè)-癌侵襲側(cè)及瘤株接種的對(duì)側(cè)-鏡像側(cè)后足的MWT、癌侵襲側(cè)的自由行走痛及自發(fā)性抬腿次數(shù)。2動(dòng)物分組給藥及藥效學(xué)評(píng)價(jià)術(shù)后第5-7d連續(xù)3天,將Surgery組雙側(cè)MWT≤0.07g的成模小鼠隨機(jī)分為模型組(Model)、CQ復(fù)方高劑量組(H-CQ,200mg/kg)、CQ復(fù)方中劑量組(M-CQ,150mg/kg)、CQ復(fù)方低劑量組(L-CQ, 100mg/kg)及陽性對(duì)照-加巴噴丁組(GBP,120mg/kg),術(shù)后第8、9、10d腹腔注射給藥,其中,Native、Sham及Model組均給予等量的生理鹽水,并于給藥前及給藥后30、60、90、120、180、240min等時(shí)間點(diǎn)測評(píng)癌侵襲側(cè)及鏡像側(cè)后足的MWT。3神經(jīng)遞質(zhì)、促炎性細(xì)胞因子水平的檢測末次行為學(xué)測評(píng)的次日再次給藥45min后,摘眼球取血后脫臼處死小鼠,取其大腦皮質(zhì)及L3-L5段脊髓組織。采用高效液相-熒光法檢測脊髓組織勻漿液內(nèi)EAA (Glu、Asp)及IAA (GABA、Gly、Tau)的水平；放射免疫法檢測大腦皮質(zhì)中內(nèi)源性致痛物質(zhì)SP和鎮(zhèn)痛物質(zhì)DynA1-13、β-EP的含量；采用AimPlex流式高通量多因子檢測技術(shù)分析血清內(nèi)IL-6、MCP-1及脊髓內(nèi)RANTES、MCP-3的含量。4 NMDA及GABAA受體拮抗劑給藥成模小鼠隨機(jī)分為荷包牡丹堿(Bicuculline, Bic)+CQ復(fù)方組(Bic+CQ)及鹽酸金剛烷胺(Amantadine, Ama)+CQ復(fù)方組(Ama+CQ)兩組,術(shù)后第8天給藥,Bic+CQ組是在給予CQ復(fù)方15min前尾靜脈注射GABAA競爭性受體拮抗劑-Bic 2mg/kg, Ama+CQ組是在給予CQ復(fù)方30min前灌胃給予NMDA非競爭性受體拮抗劑-Ama200mg/kg。并于-15min(給予Bic前)或-30min(給予Ama前)、0min(腹腔注射CQ復(fù)方前)及給予CQ復(fù)方后30、60、90、120、180、240min等時(shí)間點(diǎn)測評(píng)癌侵襲側(cè)和鏡像側(cè)后足的MWT,觀察NMDA及GABAa受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響。研究結(jié)果1小鼠CIIMIP模型的建立造模小鼠癌侵襲側(cè)后足的MWT在術(shù)后第2d開始下降,第4-7d均穩(wěn)定維持在(0.031±0.006)g～(0.057±0.029)g,明顯低于Sham組和Native組(P0.05或P0.01)；鏡像側(cè)后足的MWT亦在術(shù)后第2d開始下降,第4-7d均穩(wěn)定維持在(0.044±0.012)g～(0.101±0.038)g,明顯低于Sham組和Native組(P0.05或P0.01)。而模型小鼠左前肢和腹部未見明顯的疼痛表現(xiàn)。2 CQ復(fù)方對(duì)CIIMIP模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用及與加巴噴丁藥效的比較CIIMIP模型小鼠第一次給予CQ復(fù)方后,雙側(cè)的MWT在給藥后30min均開始升高,在30、60min達(dá)藥效高峰。對(duì)癌侵襲側(cè),H-CQ組在給藥后180mmin內(nèi)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MWT較Model組均顯著升高(P0.01或P0.05),M-CQ組在給藥后60、90min等2個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MWT較Model組均顯著升高(P0.05)。對(duì)鏡像側(cè),H-CQ組在觀察的180min內(nèi)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MWT較Model組均顯著升高(P0.01或P0.05),M-CQ組在給藥后30、60、90min等3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的MWT較Model組均顯著升高(P0.05)。連續(xù)給藥3d,CQ復(fù)方對(duì)模型小鼠CIP與MIP的鎮(zhèn)痛作用均略強(qiáng)于單次給藥,但無顯著性差異。而CIIMIP模型第一次給予加巴噴丁后60、90min達(dá)藥效高峰,且在給藥后觀察的240min內(nèi)所有時(shí)間點(diǎn)對(duì)癌侵襲側(cè)及鏡像側(cè)的MWT較Model組均顯著升高(P0.01)。連續(xù)3d給藥,加巴噴丁對(duì)模型小鼠CIP與MIP的鎮(zhèn)痛作用有下降的趨勢(shì),但無顯著性差異。3 CIIMIP小鼠脊髓組織內(nèi)EAA及IAA的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響與Native組相比,Model組小鼠L3-Ls段脊髓內(nèi)的Glu含量顯著升高(P0.05),Asp無顯著的變化；而抑制性氨基酸GABA、Gly、Tau含量均顯著降低(P0.05,P0.01)。CQ復(fù)方能顯著抑制模型小鼠脊髓內(nèi)Glu水平(P0.05或P0.01),升高Gly、GABA及Tau的水平(P0.01),且對(duì)Glu、GABA及Tau含量的影響具有量效依賴關(guān)系。4NMDA及GABAa受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響預(yù)先給予Ama能顯著增強(qiáng)CQ復(fù)方在給藥240min內(nèi)對(duì)CIP的鎮(zhèn)痛作用(P0.01或P0.05),以及CQ復(fù)方在給藥180min內(nèi)對(duì)MIP的鎮(zhèn)痛作用(P0.01或P0.05)；預(yù)先給予Bic能部分阻斷CQ復(fù)方在給藥后180min對(duì)CIP的鎮(zhèn)痛作用(P0.05),以及CQ復(fù)方在給藥后180min、240min對(duì)MIP的鎮(zhèn)痛作用(P0.05)。5 CIIMIP小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)SP、DynA1-13、β-EP的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響與Native組相比,Model組小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)內(nèi)源性的致痛物質(zhì)SP含量有顯著性升高(P0.01),內(nèi)源性的鎮(zhèn)痛物質(zhì)DynA1-13顯著降低(P0.05),p-EP僅有降低趨勢(shì),CQ復(fù)方(低、中劑量)能顯著降低SP含量(P0.05,P0.01),對(duì)DynA1-13、β-EP含量有升高作用,但無顯著性差異。6 CIIMIP小鼠脊髓組織內(nèi)RANTCS、MCP-3的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響Model組小鼠脊髓內(nèi)的趨化因子RANTES、MCP-3含量較Sham組均顯著升高(P0.01,P0.05),CQ復(fù)方(低、高劑量)能顯著降低模型小鼠脊髓組織內(nèi)RANTES、MCP-3的含量(P0.05)。7 CIIMIP小鼠血清內(nèi)IL-6、MCP-1的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響與Native組相比,Model組模型小鼠血清中的IL-6、MCP-1含量均顯著升高(P0.05),CQ復(fù)方均能顯著降低模型小鼠血清內(nèi)IL-6、MCP-1的含量(P0.01)。結(jié)論1采用S180細(xì)胞構(gòu)建的CIIMIP模型小鼠鏡像側(cè)的鏡像部位發(fā)生了與CIP趨勢(shì)相同、程度近似的MIP。2CQ復(fù)方對(duì)CIIMIP模型小鼠CIP及MIP均有明顯鎮(zhèn)痛作用,且具有量效依賴關(guān)系。在該實(shí)驗(yàn)劑量下的CQ復(fù)方的鎮(zhèn)痛效果不及加巴噴丁,但其達(dá)藥效高峰的時(shí)間略早于加巴噴丁。3 CIIMIP模型小鼠脊髓內(nèi)Glu顯著升高,GABA含量顯著降低,CQ復(fù)方可能通過抑制Glu水平,提高GABA水平,調(diào)節(jié)EAA/IAA平衡,進(jìn)而緩解疼痛。NMDA及GABAA受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明：CQ復(fù)方部分通過NMDA、GABAa受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。4 CIIMIP模型小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)SP濃度異常升高、DynA1-13濃度明顯降低,脊髓和血清內(nèi)的IL-6、RANTES、MCP-1、MCP-3等促炎性細(xì)胞因子含量顯著升高,CQ復(fù)方可能通過抑制SP及促炎性細(xì)胞因子的釋放進(jìn)一步發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
【關(guān)鍵詞】：CQ復(fù)方 鏡像痛 癌侵襲痛 神經(jīng)遞質(zhì) 促炎性細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-10
• Abstract10-16
• 中英文縮略詞表16-17
• 第一部分 實(shí)驗(yàn)研究17-57
• 前言17-23
• 實(shí)驗(yàn)一 小鼠CIIMIP模型的建立及疼痛行為學(xué)測評(píng)23-29
• 1 研究目的23
• 2 材料與方法23-24
• 2.1 動(dòng)物及瘤株23
• 2.2 主要儀器設(shè)備23
• 2.3 動(dòng)物模型的制備及分組23
• 2.4 疼痛行為學(xué)評(píng)價(jià)23-24
• 2.5 統(tǒng)計(jì)方法24
• 3 結(jié)果24-27
• 3.1 一般狀態(tài)及腫瘤組織形態(tài)觀察24-25
• 3.2 疼痛行為學(xué)的測評(píng)25-27
• 4 小結(jié)27-29
• 實(shí)驗(yàn)二 CQ復(fù)方對(duì)CIIMIP模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用及與加巴噴丁藥效的比較29-37
• 1 研究目的29
• 2 材料與方法29-30
• 2.1 動(dòng)物及瘤株29
• 2.2 主要儀器設(shè)備29
• 2.3 主要藥品及試劑29
• 2.4 藥效學(xué)評(píng)價(jià)29-30
• 2.5 統(tǒng)計(jì)方法30
• 3 結(jié)果30-35
• 3.1 CQ復(fù)方對(duì)CIIMIP模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用30-33
• 3.2 與加巴噴丁藥效的比較33-35
• 4 小結(jié)35-37
• 實(shí)驗(yàn)三 CQ復(fù)方對(duì)CIIMIP模型小鼠的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的研究37-49
• 1 研究目的37
• 2 材料與方法37-40
• 2.1 動(dòng)物及瘤株37
• 2.2 主要儀器設(shè)備37
• 2.3 主要藥品及試劑37-38
• 2.4 脊髓組織內(nèi)氨基酸水平的檢測38-39
• 2.5 NMDA及GABAA受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響39
• 2.6 大腦皮質(zhì)內(nèi)神經(jīng)肽含量的檢測39
• 2.7 脊髓組織及血清內(nèi)促炎性細(xì)胞因子含量的檢測39-40
• 2.8 統(tǒng)計(jì)方法40
• 3 結(jié)果40-46
• 3.1 CIIMIP小鼠脊髓組織內(nèi)EAA及IAA的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響40-43
• 3.2 NMDA及GABAA受體拮抗劑對(duì)CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用的影響43-44
• 3.3 CIIMIP小鼠大腦皮質(zhì)內(nèi)SP、DynA_(1-13)、β-EP的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響44-45
• 3.4 CIIMIP小鼠脊髓組織內(nèi)RANTES、MCP-3的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響45-46
• 3.5 CIIMIP小鼠血清內(nèi)IL-6、MCP-1的含量及CQ復(fù)方對(duì)其的影響46
• 4 小結(jié)46-49
• 討論49-57
• 1 CIP模型小鼠MIP現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)49
• 2 CIIMIP模型小鼠MIP發(fā)生的機(jī)制49-53
• 2.1 MIP發(fā)生的中樞機(jī)制49-52
• 2.2 MIP發(fā)生的外周機(jī)制52-53
• 3 CQ復(fù)方鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)制53-57
• 第二部分 文獻(xiàn)綜述57-65
• 參考文獻(xiàn)65-79
• 致謝79-80
• 在讀期間發(fā)表的文章80-81
• 基金項(xiàng)目81-82
• 課題參與情況82

【引證文獻(xiàn)】

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 孫曉芳;王丹巧;吳兆恩;李鵬;牛建昭;王繼峰;王巍;;帕金森病模型大鼠血液和紋狀體細(xì)胞外液左旋多巴藥代動(dòng)力學(xué)同步研究[A];2010年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

2 黃東越;陳利海;任俞;陳國強(qiáng);范秋維;于布為;;一種新的鏡像痛模型的構(gòu)建及鏡像痛形成機(jī)制的探討[A];2008年中華醫(yī)學(xué)會(huì)全國麻醉學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

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本文編號(hào)：299856