發(fā)布時間：2017-04-11 19:12

  本文關(guān)鍵詞：重要海洋病原細(xì)菌遲鈍愛德華氏菌感染小鼠及細(xì)胞的研究模型建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：雖然遲鈍愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)是一種重要的魚類病原細(xì)菌,但據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)報道,E. tarda同時也能感染鳥類、爬行類、哺乳類等高等脊椎動物,甚至人類。因此,成功建立遲鈍愛德華氏菌感染小鼠及其相關(guān)細(xì)胞的模型至關(guān)重要,這可以為我們深入考察病原菌和宿主之間的相互作用奠定基礎(chǔ),幫助我們開發(fā)出用來防治遲鈍愛德華氏菌的有效藥物和疫苗。同時,由于魚類和哺乳動物的免疫系統(tǒng)具有較高的相似性,我們還可以借助小鼠模型來彌補一些魚類模型上的技術(shù)弊端,使得我們利用更多實驗技術(shù)手段更深層次地探討病原菌或疫苗與宿主之間的相互關(guān)系。 本課題首先探索建立了遲鈍愛德華氏菌野生株EIB202感染小鼠的實驗?zāi)Ｐ?分析了不同感染途徑下小鼠體內(nèi)細(xì)菌數(shù)變化、小鼠發(fā)病率、半數(shù)致死劑量(LDs0)、小鼠發(fā)病癥狀,結(jié)果表明：野生株EIB202能使小鼠感染并使其發(fā)病或死亡�；谏鲜鲂∈蟮母腥灸Ｐ�,我們比較了遲鈍愛德華氏菌EIB202的III型分泌系統(tǒng)(TTSS)缺失株和Ⅵ型分泌系統(tǒng)(T6SS)基因缺失株的感染治病情況,結(jié)果表明TTSS和T6SS是細(xì)菌感染小鼠模型的關(guān)鍵致病因子。此外,我們建立了小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞(BMDM)、骨髓來源中性粒細(xì)胞(PMN)以及多種小鼠原代組織上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定方法�；谏鲜鲂∈蠹�(xì)胞模型,我們進(jìn)行了遲鈍愛德華氏菌EIB202的細(xì)胞感染實驗,結(jié)果表明：EIB202在巨噬細(xì)胞模型上能誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥小體及細(xì)胞焦亡,而且經(jīng)巨噬細(xì)胞調(diào)理的EIB202對于小鼠原代組織上皮細(xì)胞具有顯著增強的致病性。此外,EIB202在感染前期能被小鼠中性粒細(xì)胞有效殺傷或抑制。 本研究建立了遲鈍愛德華氏菌感染小鼠及相關(guān)細(xì)胞的研究模型,為深入研究該病原菌與宿主相互作用機(jī)制打下了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：遲鈍愛德華氏菌 小鼠 細(xì)胞 感染模型
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R-332
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 第1章 文獻(xiàn)綜述11-20
• 1.1 遲鈍愛德華氏菌11
• 1.2 小鼠作為感染模型的研究11-13
• 1.3 小鼠來源的細(xì)胞作為模型的研究13-19
• 1.3.1 小鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞(BMDM)分離鑒定及相關(guān)研究13-15
• 1.3.2 小鼠中性粒細(xì)胞研究15-17
• 1.3.3 傳代細(xì)胞模型研究17-18
• 1.3.4 小鼠組織器官原代細(xì)胞分離及相關(guān)研究18-19
• 1.4 本課題研究內(nèi)容及意義19-20
• 第2章 遲鈍愛德華氏菌野生株EIB202感染小鼠的研究20-35
• 2.1 前言20
• 2.2 實驗材料20-21
• 2.2.1 細(xì)菌及實驗動物20
• 2.2.2 主要實驗試劑與緩沖液20
• 2.2.3 培養(yǎng)基20-21
• 2.2.4 主要實驗器材及儀器設(shè)備21
• 2.3 實驗方法21-23
• 2.3.1 不同注射方式、不同注射劑量下小鼠存活率21-22
• 2.3.2 EIB202半數(shù)致死量(LD_(50))計算22
• 2.3.3 EIB202感染動力學(xué)研究22-23
• 2.3.4 小鼠感染病癥23
• 2.3.5 冷凍組織切片和病理組織切片23
• 2.4 實驗結(jié)果23-33
• 2.4.1 不同注射方式、不同注射劑量下小鼠存活率統(tǒng)計23-24
• 2.4.2 小鼠半數(shù)致死量測定結(jié)果24-26
• 2.4.3 遲鈍愛德華氏菌EIB202感染動力學(xué)結(jié)果26-27
• 2.4.4 EIB202對小鼠致病性表現(xiàn)27-30
• 2.4.5 冷凍組織切片和病理組織切片分析30-33
• 2.5 討論33-34
• 2.6 結(jié)論34-35
• 第3章 遲鈍愛德華氏菌各種突變株感染小鼠的研究35-41
• 3.1 前言35-36
• 3.2 實驗材料36
• 3.2.1 細(xì)菌及實驗動物36
• 3.2.2 主要實驗試劑與緩沖液36
• 3.2.3 培養(yǎng)基36
• 3.2.4 主要實驗器材及儀器設(shè)備36
• 3.3 實驗方法36-37
• 3.3.1 TTSS相關(guān)基因缺失株感染小鼠動力學(xué)考查36-37
• 3.3.2 T6SS相關(guān)基因缺失株小鼠體內(nèi)早期定植能力考查37
• 3.3.3 △evpP菌株在小鼠體內(nèi)感染動力學(xué)37
• 3.4 實驗結(jié)果37-39
• 3.4.1 TTSS相關(guān)基因缺失株感染小鼠動力學(xué)結(jié)果37-38
• 3.4.2 T6SS相關(guān)基因缺失株小鼠體內(nèi)早期定植能力38-39
• 3.4.3 △evpP菌株在小鼠體內(nèi)感染動力學(xué)結(jié)果39
• 3.5 討論39-40
• 3.6 結(jié)論40-41
• 第4章 EIB202感染小鼠BMDM模型的研究41-57
• 4.1 前言41
• 4.2 實驗材料41-42
• 4.2.1 細(xì)菌、細(xì)胞株及實驗動物41
• 4.2.2 主要實驗試劑與緩沖液41-42
• 4.2.4 主要實驗器材及儀器設(shè)備42
• 4.3 實驗方法42-50
• 4.3.1 骨髓來源巨噬細(xì)胞BMDM分離及培養(yǎng)42-46
• 4.3.2 EIB202對BMDM的黏附及內(nèi)化能力考察46
• 4.3.3 EIB202刺激BMDM產(chǎn)生炎癥小體情況46-48
• 4.3.4 細(xì)胞焦亡情況48
• 4.3.5 小鼠血清中IL-1β測定48-50
• 4.4 實驗結(jié)果50-56
• 4.4.1 L929細(xì)胞及BMDM分離、分化增殖結(jié)果50-52
• 4.4.2 BMDM流式細(xì)胞儀鑒定結(jié)果52-53
• 4.4.3 EIB202對BMDM的黏附率和內(nèi)化率53-54
• 4.4.4 炎癥小體激活及焦亡結(jié)果54-55
• 4.4.5 EIB202使小鼠在早期產(chǎn)生炎癥小體55-56
• 4.5 討論56
• 4.6 結(jié)論56-57
• 第5章 EIB202感染中性粒細(xì)胞(PMN)模型的研究57-65
• 5.1 前言57
• 5.2 實驗材料57-58
• 5.2.1 細(xì)菌、細(xì)胞株及實驗動物57
• 5.2.2 主要實驗試劑與緩沖液57
• 5.2.3 培養(yǎng)基57
• 5.2.4 主要實驗器材及儀器設(shè)備57-58
• 5.3 實驗方法58-61
• 5.3.1 中性粒細(xì)胞分離培養(yǎng)58-60
• 5.3.2 PMN殺菌實驗60-61
• 5.4 實驗結(jié)果61-63
• 5.4.1 兩種PMN分離方法比較61-62
• 5.4.2 PMN對EIB202吞噬及殺菌作用62-63
• 5.4.3 PMN對EIB202及其突變株殺菌作用比較63
• 5.5 討論63-64
• 5.6 結(jié)論64-65
• 第6章 巨噬細(xì)胞調(diào)理的EIB202感染小鼠組織原代細(xì)胞的研究65-74
• 6.1 前言65
• 6.2 實驗材料65-66
• 6.2.1 細(xì)菌、細(xì)胞株及實驗動物65
• 6.2.2 主要實驗試劑與緩沖液65-66
• 6.2.3 培養(yǎng)基66
• 6.2.4 主要實驗器材及儀器設(shè)備66
• 6.3 實驗方法66-68
• 6.3.1 原代細(xì)胞分離培養(yǎng)66-67
• 6.3.2 巨噬細(xì)胞系調(diào)理的EIB202(Escaped EIB202)侵染組織原代細(xì)胞實驗67-68
• 6.3.3 熒光顯微鏡觀察細(xì)菌侵染能力68
• 6.4 實驗結(jié)果68-73
• 6.4.1 細(xì)胞分離及培養(yǎng)結(jié)果68-72
• 6.4.2 侵染原代組織細(xì)胞結(jié)果72-73
• 6.5 討論73
• 6.6 結(jié)論73-74
• 第7章 結(jié)論、創(chuàng)新點與展望74-75
• 7.1 結(jié)論74
• 7.2 創(chuàng)新點74
• 7.3 展望74-75
• 參考文獻(xiàn)75-81
• 致謝81

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：重要海洋病原細(xì)菌遲鈍愛德華氏菌感染小鼠及細(xì)胞的研究模型建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：299776