小鼠第四腦室室管膜CD133+細(xì)胞及其分化譜系的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序
發(fā)布時間:2021-01-23 09:53
神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有自我更新能力,可以分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞類群,對于神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和神經(jīng)組織穩(wěn)態(tài)的維持起著重要作用。目前人們普遍認(rèn)為神經(jīng)干細(xì)胞主要分布于側(cè)腦室室管膜下區(qū)(SVZ)和海馬齒狀回顆粒下層(SGZ)。我們之前的研究發(fā)現(xiàn),小鼠第四腦室也存在著靜息態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞,并且這些神經(jīng)干細(xì)胞可以被VEGF細(xì)胞因子激活。在大腦損傷和神經(jīng)退行性疾病中,神經(jīng)干細(xì)胞可以通過分化和遷移來對神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行修復(fù)。因此,小鼠第四腦室室管膜區(qū)細(xì)胞類群的表達(dá)譜研究,對解析神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程和相關(guān)神經(jīng)性疾病的機(jī)制具有重要意義。本研究以CD133+神經(jīng)干細(xì)胞譜系示蹤小鼠為實(shí)驗(yàn)材料,分離小鼠第四腦室室管膜區(qū)的CD133+神經(jīng)干細(xì)胞及其增殖分化的后代細(xì)胞,采用優(yōu)化的SMARTseq2方案構(gòu)建單細(xì)胞c DNA文庫,使用基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的Tagmentation方法構(gòu)建測序文庫,最后在Illumina平臺進(jìn)行測序。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,我們的測序reads比對到小鼠基因組上的成功率達(dá)到91.02%,平均每個單細(xì)胞檢測到了6744個基因。我們發(fā)現(xiàn)小鼠第四腦室室管膜區(qū)存在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四種異質(zhì)性的細(xì)胞...
【文章來源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:69 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層的神經(jīng)發(fā)生Figure1.1Neurogenesisinsubgranularzoneofhippocampusdentategyrus
第 3 章 實(shí)驗(yàn)方法2)取一瓶脫氧核糖核酸酶 I(100mg),加入 10mL Nuclease-Free Water,震蕩至充分溶解,4℃放置備用。3)取 1.5ml tube,加入 1ml DMEM/F12 培養(yǎng)基,冰上放置備用。4)取兩個 6cm dish,各加 3ml HBSS,置于冰上備用。編號 1、2。5)另取 6cm dish,在 dish 底部鋪上一層定性濾紙,加入 2ml HBSS,使濾紙剛好被浸潤,置于冰上。6)將已經(jīng)注射 Tamoxifen 的轉(zhuǎn)基因小鼠或三周齡野生型小鼠引頸處死,取出大腦,迅速先后在 dish1 和 dish2 中清洗干凈血液,轉(zhuǎn)移到定性濾紙上準(zhǔn)備解剖。7)用手術(shù)刀片從腦頂部,沿中腦與小腦連接處將腦切開,此時可見倒三角型的第四腦室腔室。如圖 3.1 所示,左圖紅色線為切開位置,右圖紅色矩形為挑取的第四腦室室管膜位置。
圖 4.1. Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen 小鼠基因型鑒定凝膠電泳Figure 4.1 Genotype identification results of Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen mice圖中每兩條泳道代表一只老鼠,一條泳道表示用 ZsGreen 引物的擴(kuò)增結(jié)果,另一條泳道代表用 Wild type 引物擴(kuò)增結(jié)果。ZsGreen 引物的產(chǎn)物長度為 199bp,Wild type 引物的擴(kuò)增產(chǎn)物為 297bp。ZsGreen 純合小鼠應(yīng)表現(xiàn)為只有 199bp 產(chǎn)物,而不含有 297bp 產(chǎn)物。圖中紅色方框圈出了 ZsGreen 雜合小鼠,其它均為 ZsGreen純合小鼠。4.1.2 CD133-Cre-ERT2 小鼠基因型鑒定
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Single-Cell Sequencing Technologies: Current and Future[J]. Jialong Liang,Wanshi Cai,Zhongsheng Sun. Journal of Genetics and Genomics. 2014(10)
本文編號:2995013
【文章來源】:南昌大學(xué)江西省 211工程院校
【文章頁數(shù)】:69 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【部分圖文】:
海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層的神經(jīng)發(fā)生Figure1.1Neurogenesisinsubgranularzoneofhippocampusdentategyrus
第 3 章 實(shí)驗(yàn)方法2)取一瓶脫氧核糖核酸酶 I(100mg),加入 10mL Nuclease-Free Water,震蕩至充分溶解,4℃放置備用。3)取 1.5ml tube,加入 1ml DMEM/F12 培養(yǎng)基,冰上放置備用。4)取兩個 6cm dish,各加 3ml HBSS,置于冰上備用。編號 1、2。5)另取 6cm dish,在 dish 底部鋪上一層定性濾紙,加入 2ml HBSS,使濾紙剛好被浸潤,置于冰上。6)將已經(jīng)注射 Tamoxifen 的轉(zhuǎn)基因小鼠或三周齡野生型小鼠引頸處死,取出大腦,迅速先后在 dish1 和 dish2 中清洗干凈血液,轉(zhuǎn)移到定性濾紙上準(zhǔn)備解剖。7)用手術(shù)刀片從腦頂部,沿中腦與小腦連接處將腦切開,此時可見倒三角型的第四腦室腔室。如圖 3.1 所示,左圖紅色線為切開位置,右圖紅色矩形為挑取的第四腦室室管膜位置。
圖 4.1. Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen 小鼠基因型鑒定凝膠電泳Figure 4.1 Genotype identification results of Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen mice圖中每兩條泳道代表一只老鼠,一條泳道表示用 ZsGreen 引物的擴(kuò)增結(jié)果,另一條泳道代表用 Wild type 引物擴(kuò)增結(jié)果。ZsGreen 引物的產(chǎn)物長度為 199bp,Wild type 引物的擴(kuò)增產(chǎn)物為 297bp。ZsGreen 純合小鼠應(yīng)表現(xiàn)為只有 199bp 產(chǎn)物,而不含有 297bp 產(chǎn)物。圖中紅色方框圈出了 ZsGreen 雜合小鼠,其它均為 ZsGreen純合小鼠。4.1.2 CD133-Cre-ERT2 小鼠基因型鑒定
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]Single-Cell Sequencing Technologies: Current and Future[J]. Jialong Liang,Wanshi Cai,Zhongsheng Sun. Journal of Genetics and Genomics. 2014(10)
本文編號:2995013
本文鏈接:http://sikaile.net/yixuelunwen/jichuyixue/2995013.html
最近更新
教材專著