神經(jīng)干細(xì)胞是一類具有自我更新能力,可以分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞類群,對于神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和神經(jīng)組織穩(wěn)態(tài)的維持起著重要作用。目前人們普遍認(rèn)為神經(jīng)干細(xì)胞主要分布于側(cè)腦室室管膜下區(qū)（SVZ）和海馬齒狀回顆粒下層（SGZ）。我們之前的研究發(fā)現(xiàn),小鼠第四腦室也存在著靜息態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞,并且這些神經(jīng)干細(xì)胞可以被VEGF細(xì)胞因子激活。在大腦損傷和神經(jīng)退行性疾病中,神經(jīng)干細(xì)胞可以通過分化和遷移來對神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)行修復(fù)。因此,小鼠第四腦室室管膜區(qū)細(xì)胞類群的表達(dá)譜研究,對解析神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程和相關(guān)神經(jīng)性疾病的機(jī)制具有重要意義。本研究以CD133+神經(jīng)干細(xì)胞譜系示蹤小鼠為實(shí)驗(yàn)材料,分離小鼠第四腦室室管膜區(qū)的CD133+神經(jīng)干細(xì)胞及其增殖分化的后代細(xì)胞,采用優(yōu)化的SMARTseq2方案構(gòu)建單細(xì)胞c DNA文庫,使用基于Tn5轉(zhuǎn)座酶的Tagmentation方法構(gòu)建測序文庫,最后在Illumina平臺進(jìn)行測序。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明,我們的測序reads比對到小鼠基因組上的成功率達(dá)到91.02%,平均每個單細(xì)胞檢測到了6744個基因。我們發(fā)現(xiàn)小鼠第四腦室室管膜區(qū)存在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四種異質(zhì)性的細(xì)胞... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層的神經(jīng)發(fā)生Figure1.1Neurogenesisinsubgranularzoneofhippocampusdentategyrus

第 3 章 實(shí)驗(yàn)方法2）取一瓶脫氧核糖核酸酶 I（100mg），加入 10mL Nuclease-Free Water，震蕩至充分溶解，4℃放置備用。3）取 1.5ml tube，加入 1ml DMEM/F12 培養(yǎng)基，冰上放置備用。4）取兩個 6cm dish，各加 3ml HBSS，置于冰上備用。編號 1、2。5）另取 6cm dish，在 dish 底部鋪上一層定性濾紙，加入 2ml HBSS，使濾紙剛好被浸潤，置于冰上。6）將已經(jīng)注射 Tamoxifen 的轉(zhuǎn)基因小鼠或三周齡野生型小鼠引頸處死，取出大腦，迅速先后在 dish1 和 dish2 中清洗干凈血液，轉(zhuǎn)移到定性濾紙上準(zhǔn)備解剖。7）用手術(shù)刀片從腦頂部，沿中腦與小腦連接處將腦切開，此時可見倒三角型的第四腦室腔室。如圖 3.1 所示，左圖紅色線為切開位置，右圖紅色矩形為挑取的第四腦室室管膜位置。

圖 4.1. Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen 小鼠基因型鑒定凝膠電泳Figure 4.1 Genotype identification results of Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen mice圖中每兩條泳道代表一只老鼠，一條泳道表示用 ZsGreen 引物的擴(kuò)增結(jié)果，另一條泳道代表用 Wild type 引物擴(kuò)增結(jié)果。ZsGreen 引物的產(chǎn)物長度為 199bp，Wild type 引物的擴(kuò)增產(chǎn)物為 297bp。ZsGreen 純合小鼠應(yīng)表現(xiàn)為只有 199bp 產(chǎn)物，而不含有 297bp 產(chǎn)物。圖中紅色方框圈出了 ZsGreen 雜合小鼠，其它均為 ZsGreen純合小鼠。4.1.2 CD133-Cre-ERT2 小鼠基因型鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Single-Cell Sequencing Technologies: Current and Future[J]. Jialong Liang,Wanshi Cai,Zhongsheng Sun.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(10)



本文編號：2995013