目的:采用多瘤病毒中間T抗原（Polyoma virus middle T antigen,PyMT）過表達(dá)的慢病毒感染雌性C57BL/6小鼠乳腺上皮細(xì)胞,構(gòu)建C57BL/6乳腺癌模型,并分析腫瘤組織的病理學(xué)特點(diǎn)、分子分型等生物學(xué)特性。方法:通過將PyMT過表達(dá)質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒MDL、REV和VSVG共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,病毒液濃縮后,采用乳腺導(dǎo)管注射方法,將病毒液注射入雌性C57BL/6小鼠的乳腺導(dǎo)管中,定期觀察小鼠腫瘤發(fā)生情況,記錄腫瘤生長情況;腫瘤長徑達(dá)到1.5厘米后,取腫瘤和肺組織切片進(jìn)行HE染色,觀察腫瘤類型、生長特點(diǎn)和轉(zhuǎn)移情況;腫瘤組織冰凍切片,免疫熒光檢測GFP和CK14的共定位情況,免疫組織化學(xué)檢測腫瘤組織ERα,PR,HER2,Ki67,CK5和α-SMA表達(dá),確認(rèn)腫瘤的分子分型;提取腫瘤組織蛋白,檢測PI3K/AKT、MAPK/ERK、JAK/STAT3信號(hào)通路的激活情況,以及與增殖、抗凋亡相關(guān)分子c-MYC、CyclinD1、Bcl-2、Bcl-xl的表達(dá);當(dāng)腫瘤體積達(dá)到150 mm³左右時(shí),對小鼠進(jìn)行腹腔注射化療藥物阿... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PyMT慢病毒誘導(dǎo)C57BL/6小鼠產(chǎn)生腫瘤Figure1.C57BL/6micesdevelopedmammarytumorsafterinjectinglentivirusexpressing

冰凍切片免疫熒光檢測表達(dá) GFP 的 PyMT 與上皮細(xì)胞標(biāo)志物 CK14 2. Immunofluorescence analysis of PyMT virus infected mammary cell in green and CK14 was stained in red. Nuclear DNA was stained with blue).T 過表達(dá)慢病毒誘導(dǎo)的腫瘤病理類型為乳頭狀癌深入了解該模型腫瘤的病理特點(diǎn)，對腫瘤組織和肺組織進(jìn)行了，腫瘤病理類型為導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀癌，肺組織并未見到轉(zhuǎn)移灶。學(xué)檢測了乳腺上皮細(xì)胞標(biāo)志物 CK5 和α-SMA，結(jié)果顯示腺上缺失，肌上皮標(biāo)志物α-SMA 表達(dá)呈現(xiàn)陽性，表明腫瘤局限于層。為了解腫瘤的分子分型，免疫組織化學(xué)檢測了乳腺癌組織 Ki67 的表達(dá)，結(jié)果顯示，所有的腫瘤 HER2 表達(dá)陰性，Ki67 本 ERα與 PR 呈現(xiàn)雙陽性，其余樣本 ERα和 PR 雙陰性。

圖 3-1 H&E 分析腫瘤組織和肺組織病理特點(diǎn)Figue3-1. The tumor tissue and lung were stained with H & E. Magnification:400x.


本文編號(hào)：2992398