目的:制備抗戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）的人鼠嵌合基因工程抗體并研究其中和保護(hù)作用及特性。方法:將已獲得的抗HEV鼠源單克隆抗體基因序列進(jìn)行優(yōu)化,設(shè)計(jì)人鼠嵌合的工程化抗體基因序列,將其克隆入真核表達(dá)載體;表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染293F細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)優(yōu)化,高效制備基因工程化抗體;通過(guò)酶聯(lián)免疫反應(yīng)（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）、免疫熒光及HEV細(xì)胞感染模型,研究工程化抗體的結(jié)合能力及中和活性。結(jié)果:成功構(gòu)建基因工程化人鼠嵌合HEV保護(hù)性抗體表達(dá)載體,在293F表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)。抗體表達(dá)產(chǎn)率達(dá)30 mg/L,親和力為1.202×10-8mol/L。免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示抗體能夠靈敏、特異地與已感染HEV的Kernow細(xì)胞結(jié)合,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示抗體可保護(hù)易感的C3A細(xì)胞不被HEV感染。結(jié)論:基因工程化抗體抗體具有高效的HEV結(jié)合能力及中和作用,能有效阻斷HEV感染,并實(shí)現(xiàn)低成本高效表達(dá)。 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,40(03)北大核心

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【部分圖文】：

基因工程抗體表達(dá)載體結(jié)構(gòu)示意圖

采用Protein A在AKTA純化儀親和純化抗HEV全分子IgG，得到純化的嵌合anti-HEV IgG,SDS-PAGE鑒定并使用Tanon Gis軟件進(jìn)行半定量分析，以未轉(zhuǎn)染的293F細(xì)胞培養(yǎng)上清作為陰性對(duì)照，結(jié)果顯示抗體高效表達(dá)，該抗體重、輕鏈分子量分別為55 kDa及28 k Da（圖3），純度大于99%，表達(dá)產(chǎn)率達(dá)30 mg/L。2.4 純化后的嵌合anti-HEV IgG效價(jià)滴度檢測(cè)

采用ELISA對(duì)純化后的嵌合anti-HEV IgG進(jìn)行效價(jià)滴度檢測(cè)，以未轉(zhuǎn)染的293F細(xì)胞培養(yǎng)上清作為陰性對(duì)照，最終檢測(cè)滴度達(dá)到1∶1 280 000（圖4）。圖4 純化后的嵌合anti-HEV IgG的滴度檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HEV保護(hù)性抗體的制備與功能研究[J]. 許紀(jì)玲,蔡杰,何苗,楊永林.  中國(guó)輸血雜志. 2017(05)
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[3]人源抗H7N9血凝素中和抗體IgG的制備及鑒定[J]. 陳雅,熊四平,唐奇,王怡雯,耿以如,顧慧,徐亞如,周熒,仇鎮(zhèn)寧,馮振卿,朱進(jìn).  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(07)



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