乳酸菌胞外多糖（Lactic acid bacteria exopolysaccharide,LAB EPS）具有多種生物活性,對其研究與開發(fā)具有重要的實際意義與良好的應(yīng)用前景。本研究以實驗室保存鑒定的乳酸菌為出發(fā)菌株,篩選能夠增強細胞免疫活性的乳酸菌EPS,隨后將其進行分離純化及結(jié)構(gòu)初步鑒定,在此基礎(chǔ)上探討其對免疫細胞活性及機體特異性免疫應(yīng)答的影響。結(jié)果如下:1.對實驗室保存鑒定的110株乳酸桿菌所產(chǎn)EPS進行測定,篩選10株高產(chǎn)EPS 乳酸桿菌,其中Lactobacillus harbinensis TCP086、Lactobaillus kefiri SXJ29和Lactobacillus casei SXJ30所產(chǎn)EPS可以增強巨噬細胞增殖、吞噬以及NO釋放能力。2.將上述 Lactobacillus harbinensis TCP086、Lactobacillus kefiri SXJ29 和Lactobacillus casei SXJ30 所產(chǎn) EPS 經(jīng)過 DEAE-Sepharose Fast Flow 和 Sepharose CL-6B色譜柱進行分離純化后獲得主要均... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻綜述
    1.1 乳酸菌概述
    1.2 多糖概述
    1.3 乳酸菌胞外多糖
        1.3.1 乳酸菌胞外多糖簡介
        1.3.2 不同乳酸菌對EPS產(chǎn)量的影響
        1.3.3 EPS的提取、分離與純化
        1.3.4 EPS的分子量和單糖組成
        1.3.5 乳酸菌EPS的生物學(xué)功能
    1.4 多糖對特異性免疫應(yīng)答的影響
        1.4.1 特異性免疫
        1.4.2 由T細胞介導(dǎo)的細胞免疫應(yīng)答
        1.4.3 由B細胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答
        1.4.4 多糖對機體特異性免疫應(yīng)答的影響
    1.5 本課題的研究內(nèi)容和意義
第二章 乳桿菌胞外多糖的篩選
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 菌株
        2.1.2 細胞株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 溶液配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 乳酸菌菌株活化
        2.2.2 菌種產(chǎn)糖量測定
        2.2.3 硫酸-苯酚法測定多糖含量
        2.2.4 粗EPS的提取
        2.2.5 EPS刺激巨噬細胞RAW264.7和Ana-1增殖
        2.2.6 EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞吞噬中性紅
        2.2.7 EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞釋放NO
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 葡萄糖標準曲線的繪制
        2.3.2 乳酸菌胞外多糖含量測定結(jié)果
        2.3.3 EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞的增殖結(jié)果
        2.3.4 EPS刺激RAW264.7和Ana-1吞噬中性紅的結(jié)果
        2.3.5 EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞釋放NO的結(jié)果
    2.4 分析與討論
第三章 三種乳桿菌胞外多糖的分離純化
    3.1 材料與設(shè)備
        3.1.1 菌株和發(fā)酵條件
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 實驗方法
        3.2.1 EPS的DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換純化
        3.2.2 EPS的Sepharose CL-6B分子篩純化
        3.2.3 紫外光譜掃描
        3.2.4 紅外光譜分析
        3.2.5 多角度激光光散射儀測定多糖分子量
        3.2.6 離子色譜測定單糖組成
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 三種EPS的DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換純化結(jié)果
        3.3.2 三種EPS的Sepharose CL-6B分子篩純化結(jié)果
        3.3.3 三種EPS的紫外光譜掃描結(jié)果
        3.3.4 三種EPS的紅外掃描結(jié)果
        3.3.5 三種EPS的分子量測定結(jié)果
        3.3.6 三種EPS的單糖組成測定
    3.4 分析與討論
第四章 三種乳桿菌胞外多糖對巨噬細胞免疫活性的影響
    4.1 材料與設(shè)備
        4.1.1 細胞株
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器設(shè)備
        4.1.4 溶液配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 巨噬細胞RAW264.7和Ana-1的培養(yǎng)
        4.2.2 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞增殖
        4.2.3 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞吞噬中性紅
        4.2.4 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞釋放NO
        4.2.5 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞分泌TNF-α
        4.2.6 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞分泌IL-1β
        4.2.7 不同濃度EPS刺激RAW264.7和Ana-1細胞分泌IL-6
        4.2.8 巨噬細胞表面標志免疫熒光標記和流式細胞儀檢測
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 不同濃度EPS對巨噬細胞增殖情況檢測結(jié)果
        4.3.2 不同濃度EPS刺激巨噬細胞吞噬中性紅能力的檢測結(jié)果
        4.3.3 不同濃度EPS刺激巨噬細胞釋放NO的結(jié)果
        4.3.4 不同濃度EPS刺激巨噬細胞分泌TNF-α的結(jié)果
        4.3.5 不同濃度EPS刺激巨噬細胞分泌IL-1β的結(jié)果
        4.3.6 不同濃度EPS刺激巨噬細胞分泌IL-6的結(jié)果
        4.3.7 SXJ30 EPS刺激巨噬細胞24 h后表面標志表達結(jié)果
        4.3.8 SXJ30 EPS刺激巨噬細胞48h后表面標志表達結(jié)果
        4.3.9 SXJ30 EPS刺激巨噬細胞72 h后表面標志表達結(jié)果
    4.4 分析與討論
第五章 干酪乳桿菌SXJ30胞外多糖對樹突狀細胞免疫活性的影響
    5.1 材料與設(shè)備
        5.1.1 實驗動物
        5.1.2 主要試劑
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
        5.1.4 溶液配制
    5.2 實驗方法
        5.2.1 小鼠骨髓來源樹突狀細胞（BMDCs）的分離培養(yǎng)
        5.2.2 BMDCs表面標志免疫熒光標記和流式細胞儀檢測
        5.2.3 ELISA檢測BMDC上清中TNF-α的含量
        5.2.4 ELISA檢測BMDC上清中IL-6的含量
        5.2.5 ELISA檢測BMDC上清中IL-10的含量
        5.2.6 ELISA檢測BMDC上清中IL-12的含量
    5.3 實驗結(jié)果
        5.3.1 小鼠BMDCs培養(yǎng)結(jié)果
        5.3.2 SXJ30 EPS刺激小鼠BMDCs表面標志表達結(jié)果
        5.3.3 SXJ30 EPS刺激小鼠BMDCs后細胞因子的分泌
        5.3.4 SXJ30 EPS刺激小鼠BMDCs后IL-10/IL-12的比值
    5.4 分析與討論
第六章 干酪乳桿菌SXJ30胞外多糖增強OVA特異性免疫應(yīng)答的影響
    6.1 材料與設(shè)備
        6.1.1 實驗動物
        6.1.2 主要試劑
        6.1.3 主要儀器設(shè)備
    6.2 實驗方法
        6.2.1 小鼠分組及免疫程序
        6.2.2 OVA特異性IgG抗體水平的檢測
        6.2.3 OVA特異性IgG亞類抗體水平的檢測
        6.2.4 小鼠脾臟T淋巴細胞增殖檢測
        6.2.5 脾臟T淋巴細胞上清中細胞因子的檢測
        6.2.6 小鼠脾臟T淋巴細胞胞內(nèi)因子染色及流式細胞檢測
        6.2.7 小鼠脾臟樹突狀細胞表面染色及檢測
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 OVA特異性IgG抗體水平的檢測結(jié)果
        6.3.2 OVA特異性IgG抗體亞類IgG1,IgG2a相IgG2b水平的檢測結(jié)果
        6.3.3 SXJ30 EPS對小鼠脾臟T淋巴細胞增殖能力檢測結(jié)果
        6.3.4 SXJ30 EPS對小鼠脾臟T淋巴細胞上清中細胞因子的檢測結(jié)果
        6.3.5 小鼠脾臟T淋巴細胞胞內(nèi)因子檢測結(jié)果
        6.3.6 SXJ30 EPS刺激小鼠脾臟DCs表面標志表達的結(jié)果
    6.4 分析與討論
結(jié)論
創(chuàng)新點及展望
    1 創(chuàng)新點
    2 展望
參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2986162