本文關(guān)鍵詞：水凝膠培養(yǎng)的原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞感染Ⅱ型登革病毒對細(xì)胞產(chǎn)生IL-29的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：登革病毒(Dengue virus,DENV)是一種蟲媒病毒,主要是通過白紋伊蚊和埃及伊蚊進行傳播,每年約有5000萬-5.28億人口受到感染。DENV感染可以引起登革熱(Dengue Fever,DF)和危及生命的登革出血熱(Dengue hemorrhagic fever,DHF)及登革休克綜合征(Dengue shock syndrome,DSS),其中DHF/DSS是重癥的登革病毒感染,其主要的特征之一是血漿滲漏。目前普遍認(rèn)為DHF/DSS的發(fā)病機制主要包括病毒毒力因素,抗體依賴性感染增強效應(yīng)(antibody-dependent enhancement,ADE),宿主因素,交叉反應(yīng)性T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理損傷以及細(xì)胞因子風(fēng)暴等。眾多發(fā)病機制的提出主要是因為模型的不同,目前小鼠、人血管內(nèi)皮細(xì)胞主要以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)作為研究DENV感染發(fā)病機制的主要模型,但小鼠模型的運用并不能完全模擬人類的感染情況,細(xì)胞模型則因作用因素單一也不能確切的反映感染癥狀。近年來研究發(fā)現(xiàn)組織基底硬度是影響細(xì)胞功能的主要因素之一,正常生理條件下血管基底膜及下層基質(zhì)的彈性硬度值影響了多種與血管內(nèi)皮細(xì)胞生存、復(fù)制、遷徙和維持穩(wěn)態(tài)的重要生物學(xué)功能,不同彈性硬度條件下這些生物學(xué)功能水平差異較大。當(dāng)前利用聚丙烯酰胺凝膠構(gòu)建不同的組織硬度可以影響細(xì)胞的生物學(xué)功能,使其能夠更貼近生理環(huán)境。本實驗通過水凝膠模擬人血管內(nèi)皮細(xì)胞基底膜彈性硬度,使體外模型的建立能夠更貼近生理環(huán)境,為DENV發(fā)病機制的研究提供一個新的研究模型。目的利用水凝膠(hydrogel)模擬人類血管內(nèi)皮細(xì)胞基底膜彈性硬度,以登革病毒2型(DENV-2)NGC株感染接種于水凝膠為基底的原代HUVECs,觀察HUVECs在水凝膠與普通塑料培養(yǎng)瓶產(chǎn)生IL-29的情況。方法1.原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定:從健康新生兒的臍帶中分離并培養(yǎng)原代HUVECs,利用免疫組織化學(xué)法和流式細(xì)胞術(shù)鑒定所分離的細(xì)胞。2.水凝膠的制備和細(xì)胞接種:將原代HUVECs接種于丙烯酰胺與聚丙烯酰胺混合配制的水凝膠。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡及感染率:以MOI(multiplicity of infection)=10的DENV-2 NGC株感染HUVECs,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測48h細(xì)胞的凋亡率及病毒的感染率。4.基因芯片檢測:提取DENV-2感染48h的接種于水凝膠和普通塑料瓶的原代HUVECs的總m RNA,送檢樣本進行基因表達(dá)譜芯片的檢測。5.實時定量PCR(real-timequantitative PCR,q RT-PCR)及雙抗體夾心ELISA法實驗:通過實時定量PCR及雙抗體夾心ELISA法驗證基因芯片檢測相關(guān)基因的表達(dá)情況。結(jié)果DENV-2 NGC株感染培養(yǎng)于水凝膠的原代HUVECs 48h,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測證實原代HUVECs的病毒感染率較低,細(xì)胞凋亡率與水凝膠未感染組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);通過m RNA基因表達(dá)譜芯片、實時熒光定量PCR、雙抗體夾心ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)IL-29的表達(dá)與普通塑料細(xì)胞培養(yǎng)瓶接種的原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞受到病毒感染存在差異(P0.05)。結(jié)論利用DENV-2NGC株感染接種于水凝膠的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,通過m RNA基因表達(dá)譜芯片檢測發(fā)現(xiàn)IL-29的產(chǎn)生,并且與體外正常培養(yǎng)條件下受到DENV-2 NGC株感染后存在差異,可能為DENV的發(fā)病機制研究提供新的模型。
【關(guān)鍵詞】：DENV IL-29 水凝膠 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373.33;R392
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 中英文對照縮略詞表9-10
• 0 引言10-13
• 1 材料與方法13-28
• 2 結(jié)果28-35
• 3 討論35-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 綜述46-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 作者簡歷56-57
• 致謝57-58
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集58

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  本文關(guān)鍵詞：水凝膠培養(yǎng)的原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞感染Ⅱ型登革病毒對細(xì)胞產(chǎn)生IL-29的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：295603