目的:對MDCht9基因進行序列分析,采用原核表達體系獲得純化的重組蛋白,測定其酶學活性及穩(wěn)定性;分析MDCht9的時空表達特征,RNA干擾法探討其在家蠅生長發(fā)育過程中的功能。方法:1.MDCht9的生物信息學分析:構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,用生物信息學軟件分析MDCht9基因編碼蛋白的理化性質(zhì)、二級結(jié)構(gòu)和信號肽等,預測蛋白質(zhì)的功能;2.重組蛋白的表達及酶活的測定:以pET28a（+）為載體,構(gòu)建pET28a（+）-MDCht9重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達感受態(tài)細胞中進行誘導表達,表達產(chǎn)物用SDS-PAGE凝膠電泳鑒定,采用鎳柱對表達的蛋白進行純化,質(zhì)譜鑒定純化蛋白。以4MU-（GlcNAc）₃寡聚物為底物,熒光分析法測定重組蛋白酶活性及體外酶活性的穩(wěn)定性。3.時空表達模式分析:使用Real-time PCR技術和Western-blot技術分別從基因水平和蛋白翻譯水平,分析MDCht9在卵、各齡期幼蟲、蛹、成蟲不同發(fā)育時期的表達情況;4.RNA干擾探究MDCht9功能:以重組質(zhì)粒為模板,體外合成dsRNA,通過顯微注射法將dsRNA導入家蠅2齡末期幼蟲體內(nèi),分別在12 ... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

MDCht9基因與三種昆蟲幾丁質(zhì)酶鄰位連接樹

疏水性的分析

跨膜結(jié)構(gòu)結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]棉鈴蟲Ⅳ型幾丁質(zhì)酶的基因克隆、酶學性質(zhì)及表達譜[J]. 麥麥提艾力·阿卜杜納斯爾,馬紀,劉寧,王威,李夢鴿,古新蓉,王新,劉小寧.  昆蟲學報. 2019(02)
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碩士論文
[1]家蠅幼蟲圍食膜蛋白（MdPM-17）的基因克隆鑒定及其特性研究[D]. 羅嫚.貴州醫(yī)科大學 2017
[2]昆蟲幾丁質(zhì)酶的進化分析[D]. 萬張勇.河北科技大學 2013
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本文編號：2953851