目的:對(duì)MDCht9基因進(jìn)行序列分析,采用原核表達(dá)體系獲得純化的重組蛋白,測(cè)定其酶學(xué)活性及穩(wěn)定性;分析MDCht9的時(shí)空表達(dá)特征,RNA干擾法探討其在家蠅生長(zhǎng)發(fā)育過程中的功能。方法:1.MDCht9的生物信息學(xué)分析:構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,用生物信息學(xué)軟件分析MDCht9基因編碼蛋白的理化性質(zhì)、二級(jí)結(jié)構(gòu)和信號(hào)肽等,預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)的功能;2.重組蛋白的表達(dá)及酶活的測(cè)定:以pET28a（+）為載體,構(gòu)建pET28a（+）-MDCht9重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE凝膠電泳鑒定,采用鎳柱對(duì)表達(dá)的蛋白進(jìn)行純化,質(zhì)譜鑒定純化蛋白。以4MU-（GlcNAc）₃寡聚物為底物,熒光分析法測(cè)定重組蛋白酶活性及體外酶活性的穩(wěn)定性。3.時(shí)空表達(dá)模式分析:使用Real-time PCR技術(shù)和Western-blot技術(shù)分別從基因水平和蛋白翻譯水平,分析MDCht9在卵、各齡期幼蟲、蛹、成蟲不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況;4.RNA干擾探究MDCht9功能:以重組質(zhì)粒為模板,體外合成dsRNA,通過顯微注射法將dsRNA導(dǎo)入家蠅2齡末期幼蟲體內(nèi),分別在12 ... 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MDCht9基因與三種昆蟲幾丁質(zhì)酶鄰位連接樹

疏水性的分析

跨膜結(jié)構(gòu)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]棉鈴蟲Ⅳ型幾丁質(zhì)酶的基因克隆、酶學(xué)性質(zhì)及表達(dá)譜[J]. 麥麥提艾力·阿卜杜納斯?fàn)?馬紀(jì),劉寧,王威,李夢(mèng)鴿,古新蓉,王新,劉小寧.  昆蟲學(xué)報(bào). 2019(02)
[2]家蠅幾丁質(zhì)酶基因MDCII重組表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及表達(dá)模式研究[J]. 楊尉錦,國(guó)果,吳沁怡,李妍,付萍,張勇.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(02)
[3]幾丁質(zhì)酶在農(nóng)業(yè)方面的應(yīng)用研究概況[J]. 唐夢(mèng)君,有利利,倪紅.  南方農(nóng)業(yè). 2017(01)
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碩士論文
[1]家蠅幼蟲圍食膜蛋白（MdPM-17）的基因克隆鑒定及其特性研究[D]. 羅嫚.貴州醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]昆蟲幾丁質(zhì)酶的進(jìn)化分析[D]. 萬(wàn)張勇.河北科技大學(xué) 2013
[3]金紋細(xì)蛾I型幾丁質(zhì)酶的表達(dá)、純化及酶學(xué)活性測(cè)定[D]. 仙笑笑.太原理工大學(xué) 2013



本文編號(hào)：2953851