本文關鍵詞：慢性間歇低氧大鼠模型內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞相互作用致內(nèi)皮細胞損傷中炎癥機制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景與目的阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(Obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)是一種常見疾病,主要表現(xiàn)為睡眠狀態(tài)下反復出現(xiàn)呼吸暫停和低通氣,其重要病理生理學改變是反復呼吸暫停形成的慢性間歇性低氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH)。CIH引發(fā)機體一系列氧化應激與炎癥反應致血管內(nèi)皮損傷,顯著增加冠狀動脈動脈粥樣硬化、高血壓等心血管疾病的風險。氧化應激與炎性反應的生物活性物質(zhì)主要來源于激活的多形核粒細胞(polymorphonuclear PMN),PMN易被各種刺激因素包括CIH所激活,且PMN占循環(huán)白細胞總數(shù)的近60%,與血管內(nèi)皮細胞接觸多、接觸直接。PMN與內(nèi)皮細胞的相互作用是多種疾病的病理生理學基礎。為此,本實驗通過分離常氧大鼠和CIH暴露大鼠的PMN分別與常氧及CIH暴露的大鼠主動脈內(nèi)皮細胞共培養(yǎng),采用直接共培養(yǎng)及transwell共培養(yǎng)方式,通過觀察TNF-α及NF-κB,探討CIH環(huán)境下PMN與內(nèi)皮細胞的相互作用及機制。為臨床上預防和治療OSAS及其合并癥提供理論依據(jù)。內(nèi)容1.不同間歇低氧暴露條件下內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞共培養(yǎng)上清中TNF-α水平比較2.不同間歇低氧暴露條件下內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞共培養(yǎng)后內(nèi)皮細胞中NF-κB水平比較方法8周齡雄性Wistar大鼠18只,隨機分為常氧對照組和間歇低氧組。CIH組暴露于間歇低氧環(huán)境中,氧濃度波動于5.4%-20.7%,低氧頻率為30次/h,8 h/d,以模擬OSAS患者間歇低氧的過程。常氧對照組艙內(nèi)充入相應頻率及流量變化的壓縮空氣,持續(xù)時間6周[1]。6周后處死大鼠,腹主動脈取血,雙層Ficoll-Histopaque密度梯度離心法分離純化PMN。純化的PMN在RPMI-1640培養(yǎng)基中重懸,調(diào)整細胞濃度為1 x 106/ml[2],用于與大鼠主動脈內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)。大鼠主動脈內(nèi)皮細胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液培養(yǎng)。內(nèi)皮細胞間歇低氧組暴露于間歇低氧環(huán)境中,300秒為一循環(huán),每個循環(huán)的前45秒向細胞低氧艙內(nèi)輸入含5%co2、1.5%o2、93.5%n2的混合氣體,接下來255秒輸入含5%co2、21%o2、74%n2的混合氣體以模擬體內(nèi)內(nèi)皮細胞間歇低氧的過程,周而復始形成48次循環(huán),共4小時,每小時事件數(shù)為12次[3]。共培養(yǎng)方式分為直接共培養(yǎng)和tanswell共培養(yǎng)。直接共培養(yǎng)為pmn細胞懸液按比例直接加于接種有鼠主動脈內(nèi)皮細胞的細胞培養(yǎng)孔中;transwell共培養(yǎng)為在細胞培養(yǎng)孔中置入transwell小室,于小室中加入相同體積的pmn細胞懸液。共培養(yǎng)的pmn與內(nèi)皮細胞的比率約為10:1[2]。細胞加樣結(jié)束后將細胞培養(yǎng)板置于標準細胞培養(yǎng)箱中,共培養(yǎng)4小時。共培養(yǎng)結(jié)束后提取培養(yǎng)上清,elisa法測定上清中的tnf-α,westernblotting測定內(nèi)皮細胞中nf-κbp65濃度。共培養(yǎng)分組如下:1.常氧內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組(transwell共培養(yǎng))2.常氧內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組(直接共培養(yǎng))3.cih內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組(transwell共培養(yǎng))4.cih內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組(直接共培養(yǎng))5.常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組(transwell共培養(yǎng))6.常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組(直接共培養(yǎng))7.cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組(transwell共培養(yǎng),單純內(nèi)皮細胞激活)8.cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組(直接共培養(yǎng),單純內(nèi)皮細胞激活)9.常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組(transwell共培養(yǎng),單純pmn激活)10.常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組(直接共培養(yǎng),單純pmn激活)11.cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組(transwell共培養(yǎng),內(nèi)皮細胞和pmn均激活)12.cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組(直接共培養(yǎng),內(nèi)皮細胞和pmn均激活)結(jié)果tnf-α1.不同培養(yǎng)方式下組內(nèi)比較,除cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組外,兩種不同培養(yǎng)方式培養(yǎng)方式上清中的tnf-α水平無顯著差異。cih內(nèi)皮細胞+cihpmn直接共培養(yǎng)組培養(yǎng)上清的tnf-α濃度高于traswell組(p=0.010)。2.直接共培養(yǎng)方式下各組比較,不同cih暴露組和常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組比較,tnf-α水平均升高(均p0.05),以cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組最高,且與cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組及常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組比較,tnf-α水平差異有統(tǒng)計學意義(均p0.05),cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組及常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組間比較,前者表達tnf-α水平更高(p0.05)。3.transwell共培養(yǎng)方式下各組比較,不同cih暴露組和常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組比較,tnf-α水平均升高(均p0.05),以cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組最高,且與cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組及常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組比較,tnf-α水平差異有統(tǒng)計學意義(均p0.05),cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組及常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn量組間比較,前者表達tnf-α水平更高(p0.05)。4.常氧內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組與常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組比較,以及cih內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組與cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組比較,兩種共培養(yǎng)方式下tnf-α濃度差異無統(tǒng)計學意義。5.常氧內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組及cih內(nèi)皮細胞+等體積細胞培養(yǎng)液組transwell共培養(yǎng)與直接共培養(yǎng)比較,tnf-α濃度差異無統(tǒng)計學意義。nf-κbp651.不同培養(yǎng)方式下組內(nèi)比較,內(nèi)皮細胞與常氧pmn共培養(yǎng),直接共培養(yǎng)組與transwell共培養(yǎng)組表達的nf-κbp65量無差異(p0.05),內(nèi)皮細胞與cihpmn組直接共培養(yǎng)組比transwell共培養(yǎng)組表達更多的nf-κbp65,具有統(tǒng)計學差異(p0.05)。2.直接共培養(yǎng)方式下組間比較,cih內(nèi)皮+常氧pmn組與常氧內(nèi)皮+cihpmn組nf-κbp65表達量無統(tǒng)計學差異(p0.05),但兩組均較常氧內(nèi)皮+常氧pmn組顯著升高。cih內(nèi)皮+cihpmn組nf-κbp65表達量較其余三組顯著升高(p0.05)。3.transwell共培養(yǎng)方式下組間比較,常氧內(nèi)皮細胞+常氧pmn組、常氧內(nèi)皮細胞+cihpmn組、cih內(nèi)皮細胞+常氧pmn組、cih內(nèi)皮細胞+cihpmn組nf-κbp65量依次增高,且各組間兩兩比較均有統(tǒng)計學差異(p均0.05)。結(jié)論1.cih可直接損傷內(nèi)皮細胞啟動nf-κb炎癥通路,該炎癥通路的激活亦可通過cih激活pmn再進一步作用于內(nèi)皮細胞。2.nf-κbp65及tnf-α水平在單一內(nèi)皮細胞激活組高于單一pmn激活組,盡管并非所有組均有顯著的統(tǒng)計學意義,提示在osas患者內(nèi)皮細胞損傷機制中,cih直接損傷內(nèi)皮細胞可能占有更主要的地位。3.pmn與內(nèi)皮細胞transwell共培養(yǎng)時表達的炎癥因子增高,提示pmn的間接分泌作用與這種損傷機制有關。當兩種細胞直接共培養(yǎng)時,表達的炎癥因子亦增高,且直接共培養(yǎng)時所表達的炎癥因子趨勢上要高于transwell共培養(yǎng)時,提示直接黏附作用可能同時與這種損傷機制有關。
【關鍵詞】：慢性間歇低氧 中性多核白細胞 內(nèi)皮細胞 共培養(yǎng) 腫瘤壞死因子-α 核轉(zhuǎn)錄因子-κB
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R766;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-15
• 縮略語/符號說明15-17
• 前言17-25
• 研究現(xiàn)狀、成果17-19
• 研究目的、方法19
• 實驗材料及方法19-25
• 1.實驗動物19
• 2.主要儀器19-20
• 3.主要試劑20-21
• 4.大鼠間歇低氧模型的建立21-22
• 5.PMN的分離22-23
• 6.大鼠主動脈內(nèi)皮細胞間歇低氧模型的建立23-25
• 一、不同間歇低氧暴露條件下內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞共培養(yǎng)上清中TNF-α水平比較25-37
• 1.實驗原理25
• 2.試劑盒組成25
• 3.實驗步驟25-26
• 4.統(tǒng)計學處理26
• 5.結(jié)果26-33
• 6.討論33-36
• 7.小結(jié)36-37
• 二、不同間歇低氧暴露條件下內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞共培養(yǎng)后內(nèi)皮細胞中NF-κB水平比較37-50
• 1.所用實驗溶劑的配置37-39
• 2.蛋白提取及定量39-40
• 3.Western blotting檢測目標蛋白40-43
• 4.統(tǒng)計學處理43
• 5.結(jié)果43-47
• 6.討論47-50
• 7.小結(jié)50
• 本論文創(chuàng)新點50-51
• 思考與進一步探索51-52
• 參考文獻52-57
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明57-58
• 綜述 慢性間歇性低氧與血管內(nèi)皮細胞損傷機制的研究進展58-75
• 綜述參考文獻67-75
• 致謝75

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1 衛(wèi)朝霞,劉永波;一種新的內(nèi)皮細胞分離方法[J];河南職工醫(yī)學院學報;2003年03期

2 任德成;胡娟娟;張均田;杜冠華;;血管內(nèi)皮細胞損傷機制研究[J];醫(yī)學研究通訊;2003年10期

3 潘虹;王庭槐;;內(nèi)皮細胞caveolae,caveolin-1的生理功能[J];醫(yī)學綜述;2006年22期

4 殷觀梅;;血管內(nèi)皮細胞生長抑制因子研究進展[J];河北醫(yī)藥;2008年12期

5 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動脈粥樣硬化形成過程中內(nèi)皮細胞病變的研究(摘要)——主動脈內(nèi)皮細胞平掙,掃描電鏡及透射電鏡的觀察[J];中國醫(yī)科大學學報;1981年S1期

6 劉寶宜,陳鐵鎮(zhèn),張寶庚,宋繼業(yè);動脈粥樣硬化形成過程中內(nèi)皮細胞的形態(tài)學變化的研究(主動脈內(nèi)皮細胞平鋪技術,掃描電鏡及透射電鏡的方法)[J];中國醫(yī)科大學學報;1982年03期

7 張連元;;動脈粥樣硬化發(fā)病機理中平滑肌和內(nèi)皮細胞的機能[J];煤礦醫(yī)學;1983年04期

8 劉懷瓊;李德馨;;內(nèi)皮細胞的功能與休克的關系[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;1985年04期

9 何澤涌;;關于內(nèi)皮細胞研究的某些進展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年03期

10 何澤涌;;關于內(nèi)皮細胞研究的某些進展[J];山西醫(yī)藥雜志;1987年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 應大君;陳衛(wèi)軍;周丁華;;內(nèi)皮細胞機械感受功能的實驗研究[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

2 鄧紅;李懿萍;來茂德;;高糖環(huán)境細胞間相互作用對內(nèi)皮細胞產(chǎn)生活性氧和血管內(nèi)皮細胞生長因子的影響[A];中華醫(yī)學會病理學分會2005年學術年會論文匯編[C];2005年

3 林萍章;PualJ.Pearson;RaymondCartier;KazuhiroHashimoto;HartzellV.Schaff;;內(nèi)膜再生過程中,內(nèi)皮細胞之反應[A];海峽兩岸電子顯微學討論會論文專集[C];1991年

4 趙彭濤;李志超;董明清;賈斌;張莉莉;;LPS對培養(yǎng)的BPAECsⅠ型Na~+/H~+交換器活性的影響[A];第六次全國缺氧和呼吸病理生理學術會議論文摘要匯編[C];2003年

5 熊建瓊;朱佩芳;王正國;蔣建新;;髓樣分化蛋白-2在內(nèi)毒素與內(nèi)皮細胞結(jié)合中的作用[A];第十一次全國急診醫(yī)學學術會議暨中華醫(yī)學會急診醫(yī)學分會成立二十周年慶典論文匯編[C];2006年

6 王心華;甄永蘇;;烯二炔類抗生素力達霉素抑制內(nèi)皮細胞生長和誘導內(nèi)皮細胞凋亡[A];2000全國腫瘤學術大會論文集[C];2000年

7 李彥榮;應晨江;易海維;衣衛(wèi)杰;孟依;劉烈剛;孫秀發(fā);;綠茶多酚對牛內(nèi)皮細胞窖蛋白-1表達的影響[A];湖北省、武漢市營養(yǎng)學會第十一屆學術會議論文匯編[C];2007年

8 蔡紹皙;張莉;韓亞剛;蔣稼歡;;流動腔底面內(nèi)皮細胞圖型化研究與圖像處理[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

9 汪毅;陳允欽;;高密度脂蛋白與內(nèi)皮功能[A];第六次全國中西醫(yī)結(jié)合心血管會學術會議論文匯編[C];2002年

10 馬向紅;黃體鋼;楊萬松;周麗娟;;四氫生物喋呤對內(nèi)皮細胞產(chǎn)生一氧化氮和超氧陰離子的影響[A];中華醫(yī)學會心血管病分會第八次全國心血管病學術會議匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 ;中藥抗血栓機理及對內(nèi)皮細胞的生物醫(yī)學研究取得佳績[N];科技日報;2000年

2 趙軍;耳毒性藥物對耳蝸螺旋動脈平滑肌和內(nèi)皮細胞電生理特性的影響項目[N];科技日報;2007年

3 華朋;熱愛老年事業(yè) 投身老年醫(yī)藥[N];中國老年報;2000年

4 高國起;提升ACE2活性可消退動脈硬化斑塊[N];中國醫(yī)藥報;2010年

5 佳愉;中藥善調(diào)理 降壓重保腎[N];中國中醫(yī)藥報;2009年

6 劉道安;保護動脈內(nèi)膜 減少冠心病發(fā)生[N];中國醫(yī)藥報;2005年

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1 白云城;LPS調(diào)控靜脈內(nèi)皮細胞膜形態(tài)及通透性引發(fā)血栓形成的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

2 宋恩;內(nèi)皮細胞源性KLF15調(diào)控TM激活蛋白C抗凝血途徑及MCP-1介導炎性反應影響DVT形成的實驗研究[D];昆明醫(yī)科大學;2015年

3 宋凱;口腔癌—內(nèi)皮細胞融合的分子調(diào)控機制及潛在作用[D];武漢大學;2014年

4 薛珊珊;用代謝組學方法研究DNA甲基化對花生四烯酸代謝的影響及血管內(nèi)皮激活的機制[D];天津醫(yī)科大學;2015年

5 張可滿;氧化型LDL對血管內(nèi)皮細胞的誘導激活[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2000年

6 賈素潔;內(nèi)源性一氧化氮合酶抑制物與內(nèi)皮細胞通訊功能障礙及（口山）酮的保護作用[D];中南大學;2007年

7 郭志堅;晚期糖基化終產(chǎn)物修飾的蛋白質(zhì)對人血管內(nèi)皮細胞的病理生物學作用及其機制的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2002年

8 肖暉;內(nèi)皮細胞硫酸乙酰肝素蛋白聚糖與細胞粘附關系的實驗研究[D];山西醫(yī)科大學;2005年

9 李毅;活化蛋白C對脂多糖誘導內(nèi)皮細胞活化的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2002年

10 陳麗華;一種新的內(nèi)皮細胞可誘導性粘附分子的表達調(diào)變及功能研究[D];第四軍醫(yī)大學;2000年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王冰;Y盒結(jié)合蛋白-1C末端結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)血管新生的機制研究[D];河北大學;2015年

2 米雪楠;MicroRNAs對血管內(nèi)皮細胞衰老及血管功能影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2015年

3 王媛;Ti表面四種生物分子功能修飾層的對比研究[D];西南交通大學;2015年

4 潘芝娟;抗HLA抗體對異基因造干細胞移植預后的影響及其機制研究[D];蘇州大學;2015年

5 邵潔;TNFAIP8L1在動脈粥樣硬化中的作用研究[D];山東大學;2015年

6 蘇立男;TRPV1對內(nèi)皮細胞增殖、遷移能力的影響及相關機制[D];四川醫(yī)科大學;2015年

7 王超楠;血管周圍脂肪組織在尼古丁誘導血管內(nèi)皮細胞炎癥反應中的作用[D];河北北方學院;2015年

8 范禎禎;高壓氧對實驗兔腦血流量及腦血管內(nèi)皮細胞凋亡影響的實驗研究[D];蘭州大學;2015年

9 陳云霞;慢性間歇低氧大鼠模型內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞相互作用致內(nèi)皮細胞損傷中炎癥機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2015年

10 楊錫蘭;川芎嗪對脂多糖誘導的內(nèi)皮細胞損傷的保護作用[D];蚌埠醫(yī)學院;2015年

  本文關鍵詞：慢性間歇低氧大鼠模型內(nèi)皮細胞與中性多核白細胞相互作用致內(nèi)皮細胞損傷中炎癥機制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：294722