發(fā)布時(shí)間：2020-12-29 19:38

　　目的研究缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）在3種弓形蟲(chóng)蟲(chóng)株由速殖子到緩殖子轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用,闡釋HIF1α對(duì)弓形蟲(chóng)不同毒力蟲(chóng)株轉(zhuǎn)化的影響。方法選取3種不同毒力弓形蟲(chóng)蟲(chóng)株（Ⅰ型RH-GFP,Ⅱ型ME49-GFP和Ⅲ型VEG）,分別感染野生型HIF1α細(xì)胞（HIF1αWT）和缺陷型HIF1α細(xì)胞（HIF1αKO）,在堿性條件下進(jìn)行誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化,通過(guò)免疫熒光試驗(yàn)（Immunofluorescence assay,IFA）檢測(cè)不同條件下弓形蟲(chóng)誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化情況,通過(guò)細(xì)胞中RH-GFP和ME49-GFP熒光值的變化分析Ⅰ型和Ⅱ型弓形蟲(chóng)的轉(zhuǎn)化水平。無(wú)熒光標(biāo)記的Ⅲ型VEG蟲(chóng)株選用速殖子特異性表達(dá)蛋白SAG1作為弓形蟲(chóng)速殖子階段的特異性標(biāo)記。將包裹弓形蟲(chóng)緩殖子囊腫外層的囊壁作為緩殖子的特異性識(shí)別標(biāo)記,用DBA抗體識(shí)別,將封片的載玻片置于熒光顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)。將玻片上總量為300個(gè)被弓形蟲(chóng)感染的細(xì)胞分為3組:（1）只含有速殖子（GFP）;（2）只含有緩殖子（DBA）;（3）同時(shí)含有速殖子和緩殖子（GFP+DBA）。每個(gè)實(shí)驗(yàn)條件至少分別計(jì)數(shù)3張玻片并計(jì)算其平均值。結(jié)果最佳誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化時(shí)間為誘導(dǎo)后96h,Ⅰ型RH-GFP弓... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2020年02期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)后不同時(shí)間點(diǎn)弓形蟲(chóng)的轉(zhuǎn)化率

ME49-GFP感染的HIF1αKO細(xì)胞在誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化96h后，只含有GFP蛋白標(biāo)記的速殖子，此時(shí)弓形蟲(chóng)無(wú)轉(zhuǎn)化；在HIF1αWT細(xì)胞中，有20%～25%只含有DBA的細(xì)胞，30%左右只含有GFP的細(xì)胞，其他大部分細(xì)胞均處于轉(zhuǎn)化中期，即ME49-GFP蟲(chóng)株速殖子正在HIF1αWT細(xì)胞中發(fā)生轉(zhuǎn)化。圖2所示，3種細(xì)胞均屬于轉(zhuǎn)化中期的細(xì)胞，同時(shí)含有速殖子ME49-GFP和緩殖子外層囊壁的熒光標(biāo)識(shí)DBA，在囊壁內(nèi)可見(jiàn)到被BAG1標(biāo)記的綠色團(tuán)狀的弓形蟲(chóng)緩殖子，細(xì)胞外也散在清晰可見(jiàn)的大量速殖子ME49-GFP。2.3 III型VEG蟲(chóng)株（MOI=3）的轉(zhuǎn)化

與前兩種蟲(chóng)株在HIF1αKO細(xì)胞中的誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化結(jié)果相同，VEG感染的HIF1αKO細(xì)胞中既無(wú)DBA的形成，也沒(méi)有轉(zhuǎn)化中間階段SAG1+DBA的細(xì)胞，所有被弓形蟲(chóng)感染的細(xì)胞均只有綠色熒光蛋白標(biāo)記的SAG1；大部分HIF1αWT細(xì)胞中的VEG發(fā)生了速殖子到緩殖子的轉(zhuǎn)化，完全轉(zhuǎn)化為DBA的比例為55%～60%，均在緩殖子外形成完整包繞緩殖子的紅色環(huán)裝囊壁（圖3）。只含有速殖子的細(xì)胞比例為15%左右，其他被感染細(xì)胞處于轉(zhuǎn)化中間階段。圖4所示，細(xì)胞處于轉(zhuǎn)化中期，在被DAPI染色的細(xì)胞核旁，有清晰可見(jiàn)的緩殖子形成的囊腫，周?chē)灿写髨F(tuán)紅色DBA標(biāo)識(shí)的包繞弓形蟲(chóng)緩殖子的囊壁，其內(nèi)是由BAG1標(biāo)記的緩殖子，而在細(xì)胞外則可見(jiàn)少量游離的VEG弓形蟲(chóng)速殖子。討論


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