膿毒癥（sepsis）是宿主對感染的免疫應(yīng)答失調(diào)所致的危及生命的多器官功能障礙綜合征,而膿毒癥腹膜炎（septic peritonitis）是膿毒癥患者當(dāng)中發(fā)病率較高的一種疾病。一旦發(fā)生感染,中性粒細(xì)胞是數(shù)量最多最先到達(dá)感染部位的固有免疫細(xì)胞。在對大腸桿菌（Escherichia coli,E.coli）誘導(dǎo)的小鼠膿毒癥腹膜炎的研究中,一些核形態(tài)特異、體積較大的“大細(xì)胞”于小鼠腹腔灌洗細(xì)胞中（PLCs）被發(fā)現(xiàn),并且占有一定數(shù)量比例。本文圍繞此種“大細(xì)胞”展開研究,探索其“身份”、功能以及與膿毒癥腹膜炎的關(guān)系。結(jié)果如下:1.E.coli誘導(dǎo)膿毒癥腹膜炎模型的建立為了建立細(xì)菌感染引起的膿毒癥腹膜炎模型,本研究中選用不同劑量的E.coli（低劑量、中劑量和最高劑量）注射到小鼠（每組7只）腹腔中誘導(dǎo)膿毒癥腹膜炎,觀察其臨床癥狀和記錄生存率。模型建立后,利用臨床癥狀評分系統(tǒng)（clinical score）來評估膿毒癥腹膜炎的嚴(yán)重程度,臨床癥狀觀察指標(biāo)包括嗜睡、眶周分泌物、豎毛、呼吸窘迫和震顫等,評分≤3分則定義為輕度膿毒癥腹膜炎,評分>3分則定義為重度膿毒癥腹膜炎。結(jié)果顯示:1)低劑量和中... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：160 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
中文摘要
abstract
英文縮寫詞表
引言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 膿毒癥
        1.1.1 膿毒癥的病因
        1.1.2 膿毒癥的兩個階段
        1.1.3 膿毒癥腹膜炎
        1.1.4 膿毒癥的診斷
    1.2 中性粒細(xì)胞
        1.2.1 生活周期
        1.2.2 形態(tài)學(xué)特征
        1.2.3 遷移過程
        1.2.4 吞噬
        1.2.5 NETs和NETosis
        1.2.6 ROS
    1.3 中性粒細(xì)胞在膿毒癥中的作用
        1.3.1 中性粒細(xì)胞抗感染活性受限
        1.3.2 中性粒細(xì)胞遷移能力障礙
        1.3.3 中性粒細(xì)胞胞外陷阱（NETs）對膿毒癥的危害
        1.3.4 中性粒細(xì)胞作為診斷膿毒癥的生物學(xué)標(biāo)記物
    1.4 中性粒細(xì)胞的表型特征
        1.4.1 中性粒細(xì)胞“老化”表型特征
        1.4.2 中性粒細(xì)胞在感染中的表型變化
        1.4.3 中性粒細(xì)胞在腫瘤中的表型變化
        1.4.4 中性粒細(xì)胞抗原提呈表型特征
第2章 材料方法
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 細(xì)菌
        2.1.2 實驗動物
        2.1.3 實驗試劑
        2.1.4 實驗儀器和耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 E.coli菌種的制備以及膿毒癥腹膜炎模型的建立
        2.2.2 模型鼠PLCs的制備
        2.2.3 HE染色和計數(shù)
        2.2.4 肌肉注射和肌組織細(xì)胞的獲取
        2.2.5 透射電鏡樣品的制備
        2.2.6 中性粒細(xì)胞的分離和純化
        2.2.7 骨髓中性粒細(xì)胞體外誘導(dǎo)實驗
        2.2.8 骨髓中性粒細(xì)胞體內(nèi)誘導(dǎo)實驗
        2.2.9 細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)存活實驗
        2.2.10 淀粉、巰基乙酸鈉、CpG ODN誘導(dǎo)的無菌性腹膜炎模型的建立
        2.2.11 流感病毒模型的建立以及肺泡灌洗細(xì)胞的提取
        2.2.12 金黃色葡萄球菌的制備及其感染模型的建立
        2.2.13 細(xì)胞因子mRNA水平的檢測
        2.2.14 流式細(xì)胞術(shù)檢測
        2.2.15 免疫熒光實驗
        2.2.16 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 “大細(xì)胞”的發(fā)現(xiàn)
        3.1.1 E.coli誘導(dǎo)的膿毒癥腹膜炎小鼠的生存期和臨床表現(xiàn)
        3.1.2 E.coli誘導(dǎo)的膿毒癥腹膜炎小鼠腹腔細(xì)菌的入血情況
        3.1.3 “大細(xì)胞”的數(shù)量及形態(tài)學(xué)特征
    3.2 “大細(xì)胞”的數(shù)量變化
        3.2.1 不同劑量E.coli對“大細(xì)胞”數(shù)量的影響
        3.2.2 大劑量E.coli對“大細(xì)胞”出現(xiàn)數(shù)量的動態(tài)變化
    3.3 “大細(xì)胞”的“身份”鑒定
        3.3.1 “大細(xì)胞”的分離純化及形態(tài)
        3.3.2 “大細(xì)胞”表面ly6G表達(dá)
    3.4 肌肉感染E.COLI對E-NEUS的誘生作用
        3.4.1 肌肉組織的消化條件摸索
        3.4.2 肌肉感染E.coli后聚集的中性粒細(xì)胞數(shù)量動態(tài)變化
        3.4.3 肌肉感染E.coli后誘生e-Neus情況
    3.5 E.COLI對小鼠骨髓和人的中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)形成E-NEUS情況
        3.5.1 E.coli對骨髓中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)形成e-Neus情況
        3.5.2 E.coli對人外周血中性粒細(xì)胞誘導(dǎo)形成e-Neus情況
        3.5.3 E.coli對人HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)形成e-Neus情況
    3.6 不同誘導(dǎo)劑對小鼠體內(nèi)產(chǎn)生E-NEUS的影響
        3.6.1 CpG ODN,淀粉,巰基乙酸鈉對e-Neus產(chǎn)生的影響
        3.6.2 流感病毒對e-Neus產(chǎn)生的影響
        3.6.3 金黃色葡萄球菌對e-Neus產(chǎn)生的影響
    3.7 e-Neus的殺菌能力
        3.7.1 e-Neus的吞噬情況
        3.7.2 e-Neus的活性氧（ROS）生成情況
        3.7.3 e-Neus的NETs形成情況
        3.7.4 e-Neus內(nèi)E.coli存活情況
    3.8 e-Neus的IL-10和TNF-Α的MRNA和蛋白水平的檢測
        3.8.1 IL-10和TNF-α的m RNA水平檢測
        3.8.2 IL-10和TNF-α的蛋白水平檢測
    3.9 e-Neus的表面分子表達(dá)水平分析
        3.9.1 e-Neus的“老化”標(biāo)志CXCR4
        3.9.2 e-Neus的共刺激分子CD80和CD40
        3.9.3 e-Neus的吞噬受體CD11b
    3.10 e-Neus對膿毒癥腹膜炎過繼治療的效果評估
第4章 討論
第5章 結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝
附錄



本文編號：2944530