目的 鈣敏感受體（calcium sensing receptor,CaSR）在多數(shù)腫瘤細胞中均有表達,包括肺腺癌細胞,尤其是在高分化肺癌中高表達。鈣離子作為重要的第二信使,參與許多細胞學行為,不規(guī)則鈣振蕩作為其表現(xiàn)形式之一參與信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo),而CaSR可以介導(dǎo)不規(guī)則鈣振蕩發(fā)生。本實驗初步探究CaSR介導(dǎo)的不規(guī)則鈣振蕩在A549細胞中調(diào)控NFκB轉(zhuǎn)錄的可能機制。方法 1.用鈣離子探針Fura-2/AM孵育A549細胞,在常氧、缺氧24h和缺氧48h條件下分別給予組胺處理或未處理,同時利用鈣離子成像系統(tǒng)檢測胞漿游離鈣離子濃度的變化;在轉(zhuǎn)染CaSR-過表達質(zhì)粒后按照上述條件下檢測鈣離子濃度變化,統(tǒng)計和對比鈣振蕩各動力學參數(shù)如頻率（frequency）、累積波寬（cumulative spikeduration,CSD）和振幅（amplitude）在各組間的變化。2.轉(zhuǎn)染GFP-RelA質(zhì)粒,缺氧48h后給予10μM組胺刺激,孵育鈣離子探針Fura-red/AM后,利用共聚焦顯微鏡同步監(jiān)測胞漿鈣離子濃度和轉(zhuǎn)錄因子NFκB核轉(zhuǎn)位熒光強度變化,統(tǒng)計分析鈣振蕩各參數(shù)和核轉(zhuǎn)位熒光強度變化之間的關(guān)系。... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組別條件下不規(guī)則鈣振蕩圖：監(jiān)測胞漿鈣離子濃度時間均為1200s

圖 2. 各組別條件下野生型 A549 發(fā)生不規(guī)則鈣振蕩各參數(shù)統(tǒng)計。A.CSD(S)-NFκB；B. CSD(S)-STAT3；C.頻率 f（min-1）；D.振幅 amplitude（nM）。（各組間統(tǒng)計學差異表示為*p<0.001，#p<0.05。）統(tǒng)計學結(jié)果分析顯示：達到 NFκB 活化閾值（180 nM）的累積波寬比較：缺氧時間越長其對應(yīng)的 CSD-NFκB 明顯升高：缺氧 24h 未處理組和缺氧 48h 未處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.001）；缺氧 24h 組胺處理組和缺氧 48h 組胺處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.05）。給予組胺刺激的組別比對照組的 CSD-NFκB 也明顯升高：缺氧 24h 未處理組和缺氧 24h 組胺處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.001）；缺氧 48h 未處理組和缺氧 48h組胺處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.05）。達到 STAT3 活化閾值（395 nM）的累積波寬比較：單純的缺氧時間越長其對應(yīng)的 CSD- STAT3 明顯升高：缺氧 24h 未處理組和缺氧 48h 未處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.001）。給予組胺刺激的組別比對照組的 CSD-STAT3 也明顯升高：缺氧 24h 未處理組和缺氧 24h 組胺處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.001）；缺氧 48h 未處理組和缺氧 48h 組胺處理組有統(tǒng)計學差異（*p<0.001）。

圖 3. 各組別條件下不規(guī)則鈣振蕩代表圖。監(jiān)測胞漿鈣離子濃度時間均為 1200 s。Ai-Aiii 為 CaSR-過表達 A549 細胞在缺氧 24h 給予 10 μM 組胺刺激后的不規(guī)則鈣振蕩圖；Bi-Bii 為 CaSR-過表達 A549 細胞在缺氧 48h 后給予 10 μM 組胺刺激后的不規(guī)則鈣振蕩圖。Ci-Ciii 分別為常氧條件下給予 10 μM 組胺刺激、缺氧 24h 給予 10 μM 組胺刺激和缺氧 48h 給予 10 μM 組胺刺激后的不規(guī)則鈣振蕩圖。組胺處理時間均為 20 min。實驗結(jié)果如上圖所示：CaSR-過表達 A549 細胞不規(guī)則鈣振蕩的趨勢特點均為隨著記錄時間的延長波寬逐漸減小，振幅逐漸減小，頻率逐漸減小，這可能是由于在實驗條件下腫瘤細胞隨著監(jiān)測時間的延長而狀態(tài)不佳；且不規(guī)則鈣振蕩的振幅和頻率與常氧狀態(tài)下相比都隨著缺氧時間增加而增高，這可能是因為肺癌細胞在機體的內(nèi)環(huán)境就是缺氧狀態(tài)，且腫瘤細胞周圍有炎性細胞浸潤，故在 CaSR 過表達后在常氧條件下給予組胺處理也可發(fā)生鈣振蕩。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Calcium-sensing receptor in colorectal inflammation and cancer: Current insights and future perspectives[J]. Luca Iamartino,Taha Elajnaf,Enik? Kallay,Martin Schepelmann.  World Journal of Gastroenterology. 2018(36)



本文編號：2942368