目的:淋巴細胞在中樞淋巴器官發(fā)育成熟后,經(jīng)血流定居在外周淋巴器官,并在全身器官、組織以及炎癥部位發(fā)揮多種生物學功能。淋巴細胞歸巢是淋巴細胞遷移的一種特殊形式,不同群或亞群的淋巴細胞在移行過程中具有相對選擇性,即某一特定的淋巴細胞群或亞群定向歸巢到相應的組織或器官。淋巴細胞歸巢過程的分子基礎是淋巴細胞與各組織、器官血管內(nèi)皮細胞粘附分子的相互作用。其中,B細胞歸巢到淋巴結的過程需要通過高內(nèi)皮小靜脈在趨化因子（尤其是CXCL13）的指導下完成。然而,CXCL13并不是由高內(nèi)皮小靜脈直接產(chǎn)生,其如何介導B細胞歸巢到淋巴結的分子機制目前還未闡明。NF-κB信號通路參與免疫反應、炎癥反應、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多種生物進程。NIK作為非經(jīng)典NF-κB途徑的關鍵分子也在維持完整的淋巴系統(tǒng)功能,特別是在維持完整的淋巴結和B細胞群,發(fā)揮重要作用。但對于其在淋巴管內(nèi)皮細胞中的作用仍不甚明了,本研究旨在探索淋巴管內(nèi)皮細胞中的NIK分子對于淋巴管功能的影響及其分子機制。方法:本研究將NIK-flox小鼠與Lyvel EGFP-hCre小鼠交配繁育出淋巴管內(nèi)皮細胞條件性敲除NIK的小鼠（NIKLEC-KO,NIK... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：147 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１．１小鼠ＡＴＯ基因組座位以及ＡＴｉｄＴ靶載體和條件性ＡＭＴ等位基因的示意圖??在小鼠Ａ？：基因組座位，外顯子２中翻譯起始位點的位置用箭頭表示，編碼ＮＩＫ蛋白激酶結??

ｒ?故＿＾．．．Ｌｙｖｅ?？－Ｃｒｅ?ａｌｌｅｌｅ??圖１．３小鼠基因型ＰＣＲ鑒定結果??使用鼠尾ＤＮＡ對ＮＩＫ－ｆｌｏｘ，?ＮＩＫ－ＷＴ，Ｌｙｖｅｌ－Ｃｒｅ和Ｌｙｖｅｌ－ＷＴ基因進行ＰＣＲ后通過瓊脂糖凝??膠電泳顯示的結果，鑒定得到野生型（ＷＴ，?ＭＫ＋／＋ＬｙｖｅＩ＋／＆ｅ），雜合子（Ｈｅｔ，ＮＩＫ＋／ｆｌＬｙｖｅｌ＋／＆ｅ）和??純合的淋巴管內(nèi)皮細胞特異性敲除ＮＩＫ的小鼠（ＮＩＫＬＥＣ－ＫＱ，ＮＩＫｆｌ／ｆｌＬｙｖｅｒ／＆ｅ）。??２６??

??１４?ｋｂ??？??圖１．２?Ｌｙｖｅｌ?ＥＧＦＰ－ｈＣｒｅ轉基因小鼠的基因敲入打靶圖??通過內(nèi)部核糖體進入位點（ＩＲＥＳ），使用ｐＩＲＥＳ－ＧＦＰ－ｈＣｒｅ－ＦＮＦ載體，將基因插入??ｉｊｖｅ－／基因座位的３’非翻譯區(qū)（ＵＴＲ）。新霉素抗性基因（《ｅ〇）兩側各有一個方向相同的ＦＲＴ位??點（由？表示），通過與表達Ｆｌｐ重組酶（ＦＬＰ－ＦＲＴ重組酶系統(tǒng)）的小鼠交配在胚系去除。??Ｆｉｇ．１．２?Ｍａｐ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｌｙｖｅｌ?ＥＧＦＰ－ｈＣｒｅ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｍｉｃｅ?ｋｎｏｃｋ－ｉｎ?ｔａｒｇｅｔｉｎｇ??Ｌｙｖｅ－１?３５?ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ?ｒｅｇｉｏｎ?（ＵＴＲ）?ｉｓ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ａｎｄ?ｓｕｂｃｌｏｎｅｄ?ｉｎｔｏ?ｔｈｅ?ｐＩＲＥＳ－ＧＦＰ－ｈＣｒｅ－??ＦＮＦ?ｖｅｃｔｏｒ．?Ｔｈｅ?ｎｅｏｍｙｃｉｎ?ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｇｅｎｅ?（ｎｅｏ）?ｉｓ?ｆｌａｎｋｅｄ?ｂｙ?ＦＲＴ?ｓｉｔｅｓ?（?？）?ａｎｄ?ｉｓ?ｒｅｍｏｖｅｄ?ｂｙ??ｉｎｔｅｒｃｒｏｓｓｉｎｇ?ｗｉｔｈ?ｍｉｃｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?Ｆｌｐ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｇｅｒｍｌｉｎｅ?（ＦＬＰ－ＦＲＴ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｓｅ?ｓｙｓｔｅｍ）．??ＷＴ?ＮＩＫＬＥＣＫＯ?Ｈｅｔ??＿＿?麵？趟??Ｌｙｖｅｌ＿ｅ：１＋／Ｃｒｅ??ｒｌｊｉｗ?＋?ＮｌｌＣｆｌｏｘ?ａ；ｌｅ�。�?么顯．姨?＿?ｗ，令?ａｌｌｅｌｅ??奪■?Ｌｙｖｅ１－ＷＴ??ｒ?故＿＾．．．Ｌｙｖｅ?？－Ｃｒｅ?ａｌｌｅｌｅ??圖１．３小鼠基因型ＰＣＲ鑒定結果??使用鼠尾ＤＮＡ對ＮＩＫ－ｆｌｏｘ


本文編號：2941882