目的評價(jià)表達(dá)人源化抗血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）單克隆抗體（簡稱抗VEGF單抗）的重組CHO細(xì)胞（K11細(xì)胞）傳代穩(wěn)定性。方法細(xì)胞培養(yǎng)瓶中進(jìn)行K11細(xì)胞連續(xù)傳代,于培養(yǎng)1、4和7個(gè)月時(shí)測定K11細(xì)胞的倍增時(shí)間、單細(xì)胞抗體表達(dá)量和基因拷貝數(shù)。在傳代培養(yǎng)過程中,分別于傳代培養(yǎng)2、3、4、5和7個(gè)月時(shí)將K11細(xì)胞接種至全自動(dòng)生物反應(yīng)器中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng),測定發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)物的單抗表達(dá)量,測序單抗輕、重鏈基因;采用三步層析（親和、陰/陽離子交換層析）純化人源化抗VEGF單抗,分析人源化抗VEGF單抗的純度、電荷異質(zhì)性、一級結(jié)構(gòu)和生物學(xué)活性。結(jié)果 K11細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中連續(xù)傳代培養(yǎng)1、4和7個(gè)月時(shí),對數(shù)生長期K11細(xì)胞的倍增時(shí)間分別為25、23和34 h,單細(xì)胞抗體表達(dá)量分別為15. 6、15. 0和11. 5 pg/（個(gè)·d）,單細(xì)胞基因拷貝數(shù)分別為200、219和204 copies/個(gè)。生物反應(yīng)器發(fā)酵培養(yǎng)5批單抗,純化后單抗表達(dá)量為1. 18～2. 06 g/L,K11細(xì)胞單抗輕、重鏈基因測序結(jié)果均與理論序列一致,人源化抗VE... 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2020年02期

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

各批人源化抗VEGF單抗的CEX-HPLC分析

各批人源化抗VEGF單抗的胰酶肽圖圖譜

各批人源化抗VEGF單抗的SEC-HPLC分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2939390