發(fā)布時間：2017-04-08 17:17

  本文關鍵詞：C57小鼠和SD大鼠肝臟及紅細胞膜蛋白N-糖組的質譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1、肝臟是人體內合成蛋白質的主要器官之一,在肝臟發(fā)生病變時其組織內的糖蛋白N-糖鏈的含量和結構都會發(fā)生一系列的變化。然而目前對于肝臟組織總蛋白N-糖鏈的結構研究數(shù)據(jù)還不夠全面和深入。C57小鼠和SD大鼠是目前與人類生理生化特點最為相似且在肝臟的研究中具有重要意義的兩種模式動物。因此,本研究使用PNGase F酶分別釋放C57小鼠和SD大鼠兩種肝臟總蛋白的N-糖鏈,并通過ESI-MS(電噴霧電離質譜)鑒定和解析兩種N-糖鏈的結構組成。然后采用穩(wěn)定的苯胺同位素標記法與ESI-MS相結合對等摩爾的兩種肝臟總蛋白的N-糖鏈進行相對定量分析。最后,采用HILIC-MS以及MS/MS分離和鑒定了C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白衍生后的所有N-糖鏈的結構并定量比較了糖鏈的相對豐度的差異。所得結論如下：(1)、在C57小鼠中共有16條N-糖鏈,有2條非五糖核心結構(縮短結構)、7條高甘露糖型、4條復雜型和3條雜合型,分別占糖組總量的12.5%、6.25%、37.5%、25%、18.75%。SD大鼠中共有16條N-糖鏈,有2條非五糖核心結構(縮短結構)、7條高甘露糖型、5條復雜型和2條雜合型,分別占糖組總量的12.5%、6.25%、37.5%、31.25%、12.5%。兩種樣品中的巖藻糖基化的糖鏈都占到了總糖鏈的18.75%。在C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白中都為中性糖,并未發(fā)現(xiàn)唾液酸化的糖鏈。(2)、SD大鼠與C57小鼠糖鏈的豐度比值為0.33、0.31、0.29、0.81、0.36、0.34、0.38、0.43、0.49、0.37、0.53、0.72、0.51、0.82、0.49、0.17、0.39,數(shù)據(jù)表明,C57小鼠肝臟N-糖鏈的表達水平均高于SD大鼠,且最高可達9.37倍。2、紅細胞膜骨架蛋白系統(tǒng)中的蛋白質大部分都為糖蛋白,其糖鏈部分參與了紅細胞多種生命活動的調節(jié)。本研究運用ESI-MS對C57小鼠、SD大鼠和兔的紅細胞膜蛋白N-糖鏈的結構進行了分析與比較：C57小鼠共有6條[M+Na]+型糖鏈分子：H9N2,H3N6,H5N2,H6N2,H7N2,H8N2,其中,一條為復雜型,其余5條均為高甘露糖型。SD大鼠共有6條糖鏈,其中2條[M+2Na]2+形式的糖鏈分子：H9N2,H3N6,5條[M+Na]+形式的糖鏈分子：H5N2,H6N2,H7N2,H8N2,H9N2。(H9N2在ESI-MS中可以單、雙電荷兩種形式被檢測到),并且全部都為高甘露糖型。兔紅細胞膜蛋白N-糖鏈共檢測到20條[M+Na]+型糖鏈分子：H4N4,H5N2,H4N3,H6N2,H5N3,H4N4,H7N2, H6N3,H5N4,H8N2,H6N4,H9N2,H7N4,H2N2Fuc,H3N2Fuc,H4N3Fuc, H5N3Fuc,H6N3Fuc,H5N4Fuc,H6N4Fuc。其中包含1條非五糖核心結構,6條高甘露糖型,2條復雜型和11條雜合型糖鏈,分別占總糖組的5%、30%、10%、55%。結果表明,在C57小鼠紅細胞膜蛋白N-糖鏈中,高甘露糖型占到總糖組的83%,SD大鼠高甘露糖型為100%,而兔高甘露糖型只占到了總糖組的30%。但是兩種小鼠N-糖鏈在數(shù)量和結構類型的復雜程度上都遠遠低于兔紅細胞。由于紅細胞膜酸性糖鏈含量太少在ESI-MS中并未檢測到。
【關鍵詞】：肝臟總蛋白 紅細胞膜蛋白 N-糖鏈 ESI-MS HILIC-MS
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-22
• 1.1 肝臟9-11
• 1.1.1 肝臟的功能及特點9
• 1.1.2 肝臟在糖代謝中的作用9
• 1.1.3 肝臟在蛋白質代謝中的作用9-10
• 1.1.4 肝臟在脂類及激素類代謝中的作用10
• 1.1.5 肝臟切除后的再生功能10-11
• 1.2 SD大鼠和C57小鼠在肝臟研究中的生物學意義11-12
• 1.2.1 SD大鼠11
• 1.2.2 C57小鼠11-12
• 1.3 血紅細胞12-13
• 1.3.1 血紅細胞的結構特點12
• 1.3.2 血紅細胞功能12
• 1.3.3 血紅細胞膜的生物學特性12-13
• 1.4 蛋白N-糖基化修飾13-16
• 1.4.1 N-糖鏈的生物合成13-15
• 1.4.2 N-糖鏈的多樣性15
• 1.4.3 N-糖鏈的功能15-16
• 1.4.4 N-糖鏈的生物學活性16
• 1.5 肝臟的總蛋白N-糖基化的研究現(xiàn)狀16-17
• 1.6 紅細胞膜N-糖基化的研究現(xiàn)狀17
• 1.7 N-糖鏈的定性定量分析17-20
• 1.7.1 蛋白N-糖鏈的解離、純化17-18
• 1.7.2 糖鏈的質譜檢測分析18-19
• 1.7.3 N-糖鏈的相對定量分析19-20
• 1.8 本實驗的研究目的和意義20-22
• 第二章 SD大鼠和C57小鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的定性定量比較分析22-47
• 2.1 概述22-23
• 2.2 實驗和方法23-25
• 2.2.1 材料、試劑和儀器23
• 2.2.2 肝臟總蛋白的提取23
• 2.2.3 肝臟總蛋白N-糖鏈的解離和純化23-24
• 2.2.4 N-糖鏈的氘帶苯胺穩(wěn)定同位素標記24
• 2.2.5 糖鏈的ESI-MS、MS/MS和在線HILIC-MS檢測分析條件24-25
• 2.3 結果分析與討論25-45
• 2.3.1 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的組成分析25-26
• 2.3.2 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的定量比較分析26-36
• 2.3.3 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的結構解析36-38
• 2.3.4 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的HILIC-MS定量比較38-45
• 2.4 本章小結45-47
• 第三章 三種動物血紅細胞膜N-糖鏈的ESI-MS分析47-54
• 3.1 概述47
• 3.2 實驗和方法47-48
• 3.2.1 材料、試劑和儀器47
• 3.2.2 紅細胞膜蛋白的提取47-48
• 3.2.3 紅細胞膜蛋白N-糖鏈的解離和純化48
• 3.2.4 ESI-MS和MS/MS條件設置48
• 3.3 結果與分析48-53
• 3.4 本章小結53-54
• 結論54-56
• 參考文獻56-67
• 致謝67

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