本文關(guān)鍵詞：C57小鼠和SD大鼠肝臟及紅細(xì)胞膜蛋白N-糖組的質(zhì)譜分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：1、肝臟是人體內(nèi)合成蛋白質(zhì)的主要器官之一,在肝臟發(fā)生病變時其組織內(nèi)的糖蛋白N-糖鏈的含量和結(jié)構(gòu)都會發(fā)生一系列的變化。然而目前對于肝臟組織總蛋白N-糖鏈的結(jié)構(gòu)研究數(shù)據(jù)還不夠全面和深入。C57小鼠和SD大鼠是目前與人類生理生化特點(diǎn)最為相似且在肝臟的研究中具有重要意義的兩種模式動物。因此,本研究使用PNGase F酶分別釋放C57小鼠和SD大鼠兩種肝臟總蛋白的N-糖鏈,并通過ESI-MS(電噴霧電離質(zhì)譜)鑒定和解析兩種N-糖鏈的結(jié)構(gòu)組成。然后采用穩(wěn)定的苯胺同位素標(biāo)記法與ESI-MS相結(jié)合對等摩爾的兩種肝臟總蛋白的N-糖鏈進(jìn)行相對定量分析。最后,采用HILIC-MS以及MS/MS分離和鑒定了C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白衍生后的所有N-糖鏈的結(jié)構(gòu)并定量比較了糖鏈的相對豐度的差異。所得結(jié)論如下：(1)、在C57小鼠中共有16條N-糖鏈,有2條非五糖核心結(jié)構(gòu)(縮短結(jié)構(gòu))、7條高甘露糖型、4條復(fù)雜型和3條雜合型,分別占糖組總量的12.5%、6.25%、37.5%、25%、18.75%。SD大鼠中共有16條N-糖鏈,有2條非五糖核心結(jié)構(gòu)(縮短結(jié)構(gòu))、7條高甘露糖型、5條復(fù)雜型和2條雜合型,分別占糖組總量的12.5%、6.25%、37.5%、31.25%、12.5%。兩種樣品中的巖藻糖基化的糖鏈都占到了總糖鏈的18.75%。在C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白中都為中性糖,并未發(fā)現(xiàn)唾液酸化的糖鏈。(2)、SD大鼠與C57小鼠糖鏈的豐度比值為0.33、0.31、0.29、0.81、0.36、0.34、0.38、0.43、0.49、0.37、0.53、0.72、0.51、0.82、0.49、0.17、0.39,數(shù)據(jù)表明,C57小鼠肝臟N-糖鏈的表達(dá)水平均高于SD大鼠,且最高可達(dá)9.37倍。2、紅細(xì)胞膜骨架蛋白系統(tǒng)中的蛋白質(zhì)大部分都為糖蛋白,其糖鏈部分參與了紅細(xì)胞多種生命活動的調(diào)節(jié)。本研究運(yùn)用ESI-MS對C57小鼠、SD大鼠和兔的紅細(xì)胞膜蛋白N-糖鏈的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析與比較：C57小鼠共有6條[M+Na]+型糖鏈分子：H9N2,H3N6,H5N2,H6N2,H7N2,H8N2,其中,一條為復(fù)雜型,其余5條均為高甘露糖型。SD大鼠共有6條糖鏈,其中2條[M+2Na]2+形式的糖鏈分子：H9N2,H3N6,5條[M+Na]+形式的糖鏈分子：H5N2,H6N2,H7N2,H8N2,H9N2。(H9N2在ESI-MS中可以單、雙電荷兩種形式被檢測到),并且全部都為高甘露糖型。兔紅細(xì)胞膜蛋白N-糖鏈共檢測到20條[M+Na]+型糖鏈分子：H4N4,H5N2,H4N3,H6N2,H5N3,H4N4,H7N2, H6N3,H5N4,H8N2,H6N4,H9N2,H7N4,H2N2Fuc,H3N2Fuc,H4N3Fuc, H5N3Fuc,H6N3Fuc,H5N4Fuc,H6N4Fuc。其中包含1條非五糖核心結(jié)構(gòu),6條高甘露糖型,2條復(fù)雜型和11條雜合型糖鏈,分別占總糖組的5%、30%、10%、55%。結(jié)果表明,在C57小鼠紅細(xì)胞膜蛋白N-糖鏈中,高甘露糖型占到總糖組的83%,SD大鼠高甘露糖型為100%,而兔高甘露糖型只占到了總糖組的30%。但是兩種小鼠N-糖鏈在數(shù)量和結(jié)構(gòu)類型的復(fù)雜程度上都遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于兔紅細(xì)胞。由于紅細(xì)胞膜酸性糖鏈含量太少在ESI-MS中并未檢測到。
【關(guān)鍵詞】：肝臟總蛋白 紅細(xì)胞膜蛋白 N-糖鏈 ESI-MS HILIC-MS
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-22
• 1.1 肝臟9-11
• 1.1.1 肝臟的功能及特點(diǎn)9
• 1.1.2 肝臟在糖代謝中的作用9
• 1.1.3 肝臟在蛋白質(zhì)代謝中的作用9-10
• 1.1.4 肝臟在脂類及激素類代謝中的作用10
• 1.1.5 肝臟切除后的再生功能10-11
• 1.2 SD大鼠和C57小鼠在肝臟研究中的生物學(xué)意義11-12
• 1.2.1 SD大鼠11
• 1.2.2 C57小鼠11-12
• 1.3 血紅細(xì)胞12-13
• 1.3.1 血紅細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)12
• 1.3.2 血紅細(xì)胞功能12
• 1.3.3 血紅細(xì)胞膜的生物學(xué)特性12-13
• 1.4 蛋白N-糖基化修飾13-16
• 1.4.1 N-糖鏈的生物合成13-15
• 1.4.2 N-糖鏈的多樣性15
• 1.4.3 N-糖鏈的功能15-16
• 1.4.4 N-糖鏈的生物學(xué)活性16
• 1.5 肝臟的總蛋白N-糖基化的研究現(xiàn)狀16-17
• 1.6 紅細(xì)胞膜N-糖基化的研究現(xiàn)狀17
• 1.7 N-糖鏈的定性定量分析17-20
• 1.7.1 蛋白N-糖鏈的解離、純化17-18
• 1.7.2 糖鏈的質(zhì)譜檢測分析18-19
• 1.7.3 N-糖鏈的相對定量分析19-20
• 1.8 本實(shí)驗(yàn)的研究目的和意義20-22
• 第二章 SD大鼠和C57小鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的定性定量比較分析22-47
• 2.1 概述22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)和方法23-25
• 2.2.1 材料、試劑和儀器23
• 2.2.2 肝臟總蛋白的提取23
• 2.2.3 肝臟總蛋白N-糖鏈的解離和純化23-24
• 2.2.4 N-糖鏈的氘帶苯胺穩(wěn)定同位素標(biāo)記24
• 2.2.5 糖鏈的ESI-MS、MS/MS和在線HILIC-MS檢測分析條件24-25
• 2.3 結(jié)果分析與討論25-45
• 2.3.1 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的組成分析25-26
• 2.3.2 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的定量比較分析26-36
• 2.3.3 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的結(jié)構(gòu)解析36-38
• 2.3.4 C57小鼠和SD大鼠肝臟總蛋白N-糖鏈的HILIC-MS定量比較38-45
• 2.4 本章小結(jié)45-47
• 第三章 三種動物血紅細(xì)胞膜N-糖鏈的ESI-MS分析47-54
• 3.1 概述47
• 3.2 實(shí)驗(yàn)和方法47-48
• 3.2.1 材料、試劑和儀器47
• 3.2.2 紅細(xì)胞膜蛋白的提取47-48
• 3.2.3 紅細(xì)胞膜蛋白N-糖鏈的解離和純化48
• 3.2.4 ESI-MS和MS/MS條件設(shè)置48
• 3.3 結(jié)果與分析48-53
• 3.4 本章小結(jié)53-54
• 結(jié)論54-56
• 參考文獻(xiàn)56-67
• 致謝67

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本文編號：293304