目的建立紅色熒光標(biāo)記金黃色葡萄球菌（金葡菌）假體感染（PJI）臨床株,探究工具菌的生物學(xué)特性及和初步應(yīng)用可行性。方法通過分子克隆手段構(gòu)建mCherry紅色熒光表達(dá)質(zhì)粒,通過電轉(zhuǎn)化和噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)構(gòu)建紅色熒光標(biāo)記金葡菌PJI臨床株。通過生長曲線檢測,體外成膜和生物量分析和熒光強度測量鑒定工具菌生物學(xué)特性。采用RAW264.7細(xì)胞株、工具菌建立共培養(yǎng)模型。采用該模型示蹤不同鋅離子濃度處理的巨噬細(xì)胞對于熒光PJI金葡菌吞噬能力。使用獨立樣本t檢驗、重復(fù)測量方差分析對定量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計。結(jié)果使用Gibson系統(tǒng)成功構(gòu)建了熒光表達(dá)質(zhì)粒pRMC2-ptsmCherry,并且使用噬菌體Phage11將該質(zhì)粒成功導(dǎo)入金葡菌假體感染臨床株ST1792。較之于野生株ST1792,熒光金葡菌ST1792-pRMC2-pts-mCherry兩者的生長曲線沒有統(tǒng)計學(xué)差異（F=0.012,P>0.05）。在0.5%葡萄糖胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSBG）內(nèi),兩者的生物膜光密度（OD）值分別為（3.700±0.003）和（3.715±0.042）（t=0.6056,P>0.05）;10%滑液中生物膜OD值為（... 

【文章來源】：中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版). 2020年02期

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

圖２蠢會ｉｐ光株ｓｍ７９２－ｐ簡位－＿－ｎｊｊＱｈ？ｒ?基情ｉ￥Ｌ生：翰處：＃戚魯■征的猶測

差Ｊｆ?ｔＰ?＞?０．?０５）丨質(zhì)Ｅ為ＫＢ（：鷓鸞自??胨大豆肉湯培養(yǎng)基）條件下兩種金葡菌生長曲線，示兩者生長曲線基本一致，生長能力無差異｛Ｆ?＝０．?０１２，?Ｐ?＞０．?０５）??０?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?１５?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?３０?ｊｉｍｏｌ／Ｌ?４５?｜〇ｍｏｌ／Ｌ?６０?［ｊ．ｍｏｌ／Ｌ??０?ｍｉｎ??３０?ｍｉｎ??ＩＢＥＢＰＥＨ??＿ｊ■■??ｍｍｍｍｍ??、４０??ｍ??ｂ??Ｉ??．?１５?３０?４５?６０??？?鋅離＋濃度（｜ａｍｏｌ／Ｌ）?？??圖３不同濃度的鋅離子刺激巨噬細(xì)胞２４?ｈ后，對巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響。圖Ａ為不同時間點熒光顯微鏡下（ｘ６３）觀察??到的吞噬情況；圖Ｂ為不同培養(yǎng)條件對巨噬細(xì)胞吞噬率的影響，結(jié)果表明鋅離子濃度＞３０?ｐｍｏｌ／Ｌ對巨噬細(xì)胞的吞噬率的影??響差異有統(tǒng)計學(xué)意義，其中＾－３０｜＾〇１／１＾和０｜＾〇１／１４農(nóng)度比較（￡＝４．７５，／）＜０．０１），１＾５（＾１１１〇１／１＾和０｜＾１１１〇１／：１濃度比較（《?＝??４．?０８６，Ｐ?＜?０．?０５），ｃ￣６０?ｊｊｉｍｏｌ／Ｌ?和?０?ｐｍｏｌ／Ｌ?濃度比較（ｉ?＝?４．?７８６，Ｐ?＜?０．?０１）??２４??４８??培養(yǎng)時ｆｎｌ?（ｈ）??７２??４?Ｉ－??４８?ｈ??２４?ｈ??陰性??０．??０６ＳＯ??１０??３?２?１??（Ｊｓ／ｓｏ／ｓ／ｄ／ｏｌ?＞０？南絮保貧１＾??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]穩(wěn)定生物發(fā)光金葡菌臨床株假體周圍關(guān)節(jié)感染動物模型的構(gòu)建[J]. 郭閣永,王加興,談佳琪,湯瑾,王堅鏹,沈灝.  中華關(guān)節(jié)外科雜志(電子版). 2016(04)
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本文編號：2929017