TLRs信號(hào)通路激活的MSCs外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞極化及外泌體微流芯片提取方法研究
發(fā)布時(shí)間:2020-12-19 00:22
研究背景巨噬細(xì)胞在組織損傷修復(fù)中扮演重要角色,按其免疫調(diào)節(jié)的功能可分為促炎M1型和抗炎M2型。兩者在一定的條件下可發(fā)生表型轉(zhuǎn)換,巨噬細(xì)胞的極化方向一定程度上影響了組織修復(fù)的進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn),細(xì)胞囊泡系統(tǒng)及細(xì)胞外泌體亦是調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化的重要途徑。間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(Mesenchymal stem cells derived exosomes,MSCs-Exo)由于其能夠發(fā)揮和間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)相似的生物學(xué)特性,日益得到重視。近年來研究表明,激活MSCs上不同的Toll樣受體(Toll-like receptors,TLRs)導(dǎo)致MSCs產(chǎn)生不同的炎癥調(diào)節(jié)因子,進(jìn)而通過外泌體傳遞細(xì)胞因子調(diào)控炎癥反應(yīng)。然而,不同TLRs信號(hào)刺激產(chǎn)生的外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響及在其中所起的作用卻未見報(bào)道。因此,明確MSCs與巨噬細(xì)胞之間的相互作用關(guān)系有利于我們更深刻的理解MSCs在組織損傷修復(fù)中對(duì)疾病病程的潛在影響,從而在臨床上為基于MSCs-Exo無細(xì)胞免疫療法提供新思路。外泌體是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn),被認(rèn)為是臨床上重要的疾病診療生物標(biāo)志物,可以揭示源細(xì)...
【文章來源】:湖北科技學(xué)院湖北省
【文章頁數(shù)】:57 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
倒置熒光顯微鏡下觀察MSCs形態(tài)及成骨成脂誘導(dǎo)結(jié)果
不表達(dá) CD34(4.50﹪)、CD45(4.62﹪)(圖2),符合公認(rèn)的 MSCs 表型,流式結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)所用的 BM-MSCs 符合間充質(zhì)干細(xì)胞特性。圖 2 流式細(xì)胞術(shù)對(duì) MSCs 表面標(biāo)記物的鑒定結(jié)果注:MSCs 表達(dá) CD90、CD29、CD44,不表達(dá) CD45、CD342.2 BM-MSCs 分泌的外泌體特性透射電子顯微鏡下觀察 BM-MSCs 分泌的 exosome(MSCs-Exo)為圓形或橢圓形的形態(tài),直徑約為直徑多為 40-200 nm 之間(圖 3),有完整的雙層膜囊泡結(jié)構(gòu)。Western blot 顯示提取的外泌體表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體標(biāo)志性蛋白CD9、HSP70,而 BM-MSCs 幾乎不表達(dá) HSP70 標(biāo)記物(圖 4)。透射電鏡及 Western blot 結(jié)果均證明 BM-MSCs 能正常分泌 exosome,可用于后面的實(shí)驗(yàn)研究。圖 3 透射電鏡下 MSCs-Exo 的形態(tài) (200 nm
2 流式細(xì)胞術(shù)對(duì) MSCs 表面標(biāo)記物的鑒定結(jié)Cs 表達(dá) CD90、CD29、CD44,不表達(dá) CD4外泌體特性下觀察 BM-MSCs 分泌的 exosome(M為直徑多為 40-200 nm 之間(圖 3),示提取的外泌體表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌Cs 幾乎不表達(dá) HSP70 標(biāo)記物(圖 4)。tern blot 結(jié)果均證明 BM-MSCs 能正常
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]外泌體分離與鑒定方法的研究進(jìn)展[J]. 龔春梅,徐遠(yuǎn)飛,周繼昌. 生命科學(xué). 2018(03)
[2]巨噬細(xì)胞極化的研究進(jìn)展[J]. 宛碩,黃艷,陳庭金,徐勁,余新炳. 中國病原生物學(xué)雜志. 2015(11)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的特性及應(yīng)用基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J]. 連真珍,林紹強(qiáng). 中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2013(01)
本文編號(hào):2924886
【文章來源】:湖北科技學(xué)院湖北省
【文章頁數(shù)】:57 頁
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
倒置熒光顯微鏡下觀察MSCs形態(tài)及成骨成脂誘導(dǎo)結(jié)果
不表達(dá) CD34(4.50﹪)、CD45(4.62﹪)(圖2),符合公認(rèn)的 MSCs 表型,流式結(jié)果表明,本實(shí)驗(yàn)所用的 BM-MSCs 符合間充質(zhì)干細(xì)胞特性。圖 2 流式細(xì)胞術(shù)對(duì) MSCs 表面標(biāo)記物的鑒定結(jié)果注:MSCs 表達(dá) CD90、CD29、CD44,不表達(dá) CD45、CD342.2 BM-MSCs 分泌的外泌體特性透射電子顯微鏡下觀察 BM-MSCs 分泌的 exosome(MSCs-Exo)為圓形或橢圓形的形態(tài),直徑約為直徑多為 40-200 nm 之間(圖 3),有完整的雙層膜囊泡結(jié)構(gòu)。Western blot 顯示提取的外泌體表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體標(biāo)志性蛋白CD9、HSP70,而 BM-MSCs 幾乎不表達(dá) HSP70 標(biāo)記物(圖 4)。透射電鏡及 Western blot 結(jié)果均證明 BM-MSCs 能正常分泌 exosome,可用于后面的實(shí)驗(yàn)研究。圖 3 透射電鏡下 MSCs-Exo 的形態(tài) (200 nm
2 流式細(xì)胞術(shù)對(duì) MSCs 表面標(biāo)記物的鑒定結(jié)Cs 表達(dá) CD90、CD29、CD44,不表達(dá) CD4外泌體特性下觀察 BM-MSCs 分泌的 exosome(M為直徑多為 40-200 nm 之間(圖 3),示提取的外泌體表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞外泌Cs 幾乎不表達(dá) HSP70 標(biāo)記物(圖 4)。tern blot 結(jié)果均證明 BM-MSCs 能正常
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]外泌體分離與鑒定方法的研究進(jìn)展[J]. 龔春梅,徐遠(yuǎn)飛,周繼昌. 生命科學(xué). 2018(03)
[2]巨噬細(xì)胞極化的研究進(jìn)展[J]. 宛碩,黃艷,陳庭金,徐勁,余新炳. 中國病原生物學(xué)雜志. 2015(11)
[3]骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的特性及應(yīng)用基礎(chǔ)研究進(jìn)展[J]. 連真珍,林紹強(qiáng). 中華細(xì)胞與干細(xì)胞雜志(電子版). 2013(01)
本文編號(hào):2924886
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