目的:建立一種乳鼠心臟成纖維細胞分離、培養(yǎng)及鑒定的方法。方法:選取新出生的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型膠原酶消化組織,差速貼壁法分離純化心臟成纖維細胞;倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)特征及生長情況,并進行Vimentin免疫組化對培養(yǎng)的原代細胞進行鑒定,觀察原代細胞生長中出現(xiàn)污染情況。結(jié)果:差速貼壁60～90 min后鏡下可見圓形細胞貼壁,2 d后可見細胞呈梭形、扁平形、三角形或多角形,且細胞數(shù)量增多、核分裂相增多;第3～4天時細胞生長約90%,免疫組化見細胞染色達90%以上,在原代細胞培養(yǎng)48 h時出現(xiàn)細菌污染。結(jié)論:成功建立一種穩(wěn)定、有效的心臟成纖維細胞培養(yǎng)方法。 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020年04期

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【部分圖文】：

原代培養(yǎng)的成纖維細胞(100×)

心臟主要由成纖維細胞、心肌細胞、血管內(nèi)皮細胞及血管平滑肌細胞等組成。心臟成纖維細胞是心臟纖維化的關(guān)鍵效應(yīng)細胞[7]心臟成纖維細胞的遷移及增殖能力極強，與心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)[8-10]，與多種心臟疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)，如高血壓性心肌肥厚、肥厚性心肌病、缺血性心肌病以及放射性心臟損傷等，故建立一種穩(wěn)定、有效的體外心臟成纖維細胞對臨床心血管疾病的研究、防治有著深遠意義。圖3 原代培養(yǎng)48 h時細菌污染結(jié)果(100×)

圖2 免疫組化檢測Vimentin在成纖維細胞表達(100×)目前關(guān)于心臟成纖維細胞的原代培養(yǎng)方法較多，大多都是從成年鼠或乳鼠心臟中分離培養(yǎng)[11-15]，也可從胚胎鼠心臟中分離培養(yǎng)心臟成纖維細胞[16]，較為常用的是酶消化法及組織塊貼壁法。酶消化法包括單純胰蛋白酶消化[17-18]、消化過夜再用Ⅱ型膠原蛋白酶消化[19-20]以及蛋白酶混合Ⅰ型膠原酶聯(lián)合消化[14]。消化法是利用消化酶將基質(zhì)、纖維等消化去除，從而使細胞分離出來。胰蛋白酶主要作用是分解蛋白質(zhì)，對細胞膜破壞力強，消化細胞時若時間控制不好易造成細胞損傷。膠原酶以消化膠原為主，作用緩和。劉美麗等[21]取SD成年大鼠心臟成纖維細胞，對不同消化酶組合及不同時間點進行比較，最后發(fā)現(xiàn)單用膠原酶消化60 min所得細胞數(shù)量最多，且細胞狀態(tài)佳、死亡率低、增值能力強等。


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