目的:建立一種乳鼠心臟成纖維細(xì)胞分離、培養(yǎng)及鑒定的方法。方法:選取新出生的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型膠原酶消化組織,差速貼壁法分離純化心臟成纖維細(xì)胞;倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)特征及生長(zhǎng)情況,并進(jìn)行Vimentin免疫組化對(duì)培養(yǎng)的原代細(xì)胞進(jìn)行鑒定,觀察原代細(xì)胞生長(zhǎng)中出現(xiàn)污染情況。結(jié)果:差速貼壁60～90 min后鏡下可見(jiàn)圓形細(xì)胞貼壁,2 d后可見(jiàn)細(xì)胞呈梭形、扁平形、三角形或多角形,且細(xì)胞數(shù)量增多、核分裂相增多;第3～4天時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)約90%,免疫組化見(jiàn)細(xì)胞染色達(dá)90%以上,在原代細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)出現(xiàn)細(xì)菌污染。結(jié)論:成功建立一種穩(wěn)定、有效的心臟成纖維細(xì)胞培養(yǎng)方法。 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020年04期

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原代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞(100×)

心臟主要由成纖維細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及血管平滑肌細(xì)胞等組成。心臟成纖維細(xì)胞是心臟纖維化的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞[7]心臟成纖維細(xì)胞的遷移及增殖能力極強(qiáng)，與心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)[8-10]，與多種心臟疾病發(fā)生發(fā)展相關(guān)，如高血壓性心肌肥厚、肥厚性心肌病、缺血性心肌病以及放射性心臟損傷等，故建立一種穩(wěn)定、有效的體外心臟成纖維細(xì)胞對(duì)臨床心血管疾病的研究、防治有著深遠(yuǎn)意義。圖3 原代培養(yǎng)48 h時(shí)細(xì)菌污染結(jié)果(100×)

圖2 免疫組化檢測(cè)Vimentin在成纖維細(xì)胞表達(dá)(100×)目前關(guān)于心臟成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法較多，大多都是從成年鼠或乳鼠心臟中分離培養(yǎng)[11-15]，也可從胚胎鼠心臟中分離培養(yǎng)心臟成纖維細(xì)胞[16]，較為常用的是酶消化法及組織塊貼壁法。酶消化法包括單純胰蛋白酶消化[17-18]、消化過(guò)夜再用Ⅱ型膠原蛋白酶消化[19-20]以及蛋白酶混合Ⅰ型膠原酶聯(lián)合消化[14]。消化法是利用消化酶將基質(zhì)、纖維等消化去除，從而使細(xì)胞分離出來(lái)。胰蛋白酶主要作用是分解蛋白質(zhì)，對(duì)細(xì)胞膜破壞力強(qiáng)，消化細(xì)胞時(shí)若時(shí)間控制不好易造成細(xì)胞損傷。膠原酶以消化膠原為主，作用緩和。劉美麗等[21]取SD成年大鼠心臟成纖維細(xì)胞，對(duì)不同消化酶組合及不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行比較，最后發(fā)現(xiàn)單用膠原酶消化60 min所得細(xì)胞數(shù)量最多，且細(xì)胞狀態(tài)佳、死亡率低、增值能力強(qiáng)等。


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